波動性高糖誘導胰島β細胞凋亡研究.pdf

1、目前在全世界范圍內(nèi)糖尿病的發(fā)病人群正在日益增加。關(guān)于其發(fā)病機制的研究已成為熱點問題。近年來,胰島細胞凋亡成為了糖尿病研究的一大熱點。葡萄糖毒性在糖尿病的慢性高血糖狀態(tài)下可誘導胰島β細胞凋亡。但以往的研究多集中于慢性持續(xù)性高糖的作用,事實上,流行病學調(diào)查資料顯示在糖尿病患者體內(nèi)尚存在著另一種非常重要的葡萄糖代謝紊亂形式,即波動性高血糖。而對于更符合糖尿病患者實際情況的血糖波動,關(guān)于其對胰島β細胞凋亡影響的報道仍屬少見,且具體作用機制尚不清

2、楚。現(xiàn)已明確慢性高血糖與高游離脂肪酸(FFA)都會導致細胞氧化應(yīng)激作用的加強。高血糖致線粒體氧化應(yīng)激是胰島β細胞凋亡重要原因。因此,本實驗通過觀測INS-1細胞凋亡情況及檢測氧化應(yīng)激相關(guān)因子,探討波動性高糖對胰島β細胞凋亡的影響及氧化應(yīng)激在其中所起到的作用。
　　 目的:研究波動性高糖對胰島β細胞凋亡的影響及機制。
　　 方法:體外培養(yǎng)大鼠胰島細胞株INS-1,分對照組(葡萄糖5.5mmol/L,NG)、持續(xù)性高糖組(葡

3、萄糖33.3mmol/L,SHG)、波動性高糖組(葡萄糖5.5mmol/L或33.3mmol/L,每12h交替,IHG),培養(yǎng)3d。采用MTT分析方法評價各組Ins-1細胞增殖情況;Hoechst33258染色熒光顯微鏡觀察細胞凋亡情況;Annexin V/PI標記后流式細胞儀檢測細胞凋亡率;硫代巴比妥酸法測量脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)水平;流式細胞儀測定活性氧簇(ROS)的水平,以及二硫代二硝基苯甲酸比色法測定谷胱甘肽(GSH)含量

4、。
　　 結(jié)果:(1)MTT檢測示持續(xù)性或波動性高糖對β細胞的增殖均有明顯的抑制作用,波動性高糖組抑制作用更顯著(P＜0.05);(2)持續(xù)性及波動性高糖作用下細胞呈現(xiàn)凋亡改變,波動性高糖作用強于持續(xù)性高糖(凋亡率:對照組(2.79±0.96)％,IHG(23.66±2.42)％,sHG(13.12±5.91)％,P＜0.05);(3)持續(xù)性及波動性高糖組細胞內(nèi)MDA水平、ROS水平明顯升高,GSH水平明顯降低(P均＜0.05)