姜黃素及PI3K抑制劑LY294002對鼠卵巢癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系T1、T2、T3的生長抑制作用.pdf

1、目的：
　　 卵巢上皮癌來源于卵巢上皮細(xì)胞,目前,對其發(fā)生癌變的分子生物學(xué)機(jī)制還不是十分明確。由于其發(fā)生存在遺傳復(fù)雜性及基因突變多元性,為此,本研究應(yīng)用了一個新的細(xì)胞體系,該體系以逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體,將多種確定可引起遺傳突變的一系列常見癌基因轉(zhuǎn)染到p53基因敲除的雌性成年大鼠的卵巢表面上皮細(xì)胞內(nèi)。要生成這種具有遺傳定義的卵巢上皮癌細(xì)胞系,通過將編碼人類c-myc原癌基因,鼠K-rasG12D以及HA標(biāo)記的鼠十四(烷)?；疉kt-1

2、癌基因轉(zhuǎn)染到由K5-TVA-p53敲除的大鼠分離出的卵巢上皮細(xì)胞內(nèi)。根據(jù)目前的研究結(jié)果已證實,單獨轉(zhuǎn)染e-mye,K-ras或Akt基因其中的一種,并不能使p53敲除的大鼠卵巢表面上皮細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)變,然而,轉(zhuǎn)染至少這三個癌基因中的任意兩種,可使卵巢表面上皮細(xì)胞表型發(fā)生癌變。大鼠卵巢癌細(xì)胞系的生成如下:C1(基因型:p53-/-,c-myc,K-ras),C2(基因型:p53-/-,c-myc,Akt),C3(基因型:p53-/-,.K-r

3、as,Akt)。將C1,C2和C3細(xì)胞注射于裸鼠腹腔內(nèi),所有結(jié)果表明其形成的腹腔擴(kuò)散癌組織與女性Ⅲ期卵巢癌非常相似。同時,與人卵巢癌相似的是,腫瘤很少發(fā)生肝臟或脾臟轉(zhuǎn)移,而只局限于腹腔,松散的附著于腹膜表面、腸系膜和生殖器官。組織學(xué)顯示,來自C1和C2細(xì)胞的腹腔腫瘤類似卵巢漿液性乳頭狀癌,這是女性卵巢癌最常見的類型。來自C3細(xì)胞所產(chǎn)生的腫瘤類似低分化卵巢癌。由C1,C2和C3來源的腫瘤結(jié)節(jié)分離后,進(jìn)行體外培養(yǎng),形成T1,T2和T3腫瘤細(xì)

4、胞系。
　　 Akt是存在于人類染色體中的鼠類胸腺瘤病毒(Akt-8)致癌基因的同源物,已被定義為癌基因,因其蛋白質(zhì)產(chǎn)物的激酶活性區(qū)的氨基酸序列與蛋白激酶A(PKA)和C(PKC)有高度的同源性,又被命名為PKB。Akt/PKB是PI3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中一個重要的下游靶激酶,具有絲/蘇氨酸激酶活性。PDK/Akt通路是一個經(jīng)典抗凋亡、促存活的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,在腫瘤發(fā)生增殖、侵襲轉(zhuǎn)移及化療耐藥中發(fā)揮重要作用。
　　 目前,我們

5、的前期研究結(jié)果已表明,在人卵巢上皮癌組織中,鉑類藥物的原發(fā)性耐藥可能與PI3K/Akt信號通路異?；罨嘘P(guān);姜黃素通過PI3K/Akt信號通路抑制鼠轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系T3的增殖。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討姜黃素與PI3K抑制劑LY294002及兩者聯(lián)合用藥對鼠卵巢癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系T1、T2、T3的生長抑制作用及其作用機(jī)制,為卵巢癌個性化及靶向治療提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 0～80μmol/L姜黃素與相同濃度LY2

6、94002單獨及聯(lián)合用藥作用12～48h,MTT實驗方法檢測T1、T2、T3細(xì)胞增殖活性;流式細(xì)胞儀檢測T2細(xì)胞周期時相變化;Western blot方法檢測細(xì)胞內(nèi)Akt、p-Akt蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 姜黃素能顯著抑制T1、T2、T3細(xì)胞增殖,呈時間與劑量依賴性,其中對T2、T3抑制作用更明顯,P值＜0.05;細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期,部分細(xì)胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)學(xué)改變;姜黃素明顯降低T2細(xì)胞內(nèi)p-Akt蛋白的