DNA損傷試劑對(duì)HeLa細(xì)胞的細(xì)胞周期檢查點(diǎn)的影響.pdf

1、p53蛋白參與了細(xì)胞周期檢查點(diǎn)和DNA修復(fù)等多種生命活動(dòng)中，在維護(hù)基因組完整性中發(fā)揮重要的作用。多種類(lèi)型的腫瘤中均發(fā)現(xiàn)p53的突變，提示腫瘤細(xì)胞體系中DNA損傷檢查點(diǎn)的機(jī)制可能不同于正常的組織細(xì)胞。
　　 為探討在p53失活的腫瘤細(xì)胞中DNA甲基化試劑引發(fā)的DNA損傷對(duì)于細(xì)胞周期的影響，我們將同步化在G1期、S期和G2/M期的HeLa細(xì)胞分別進(jìn)行甲磺酸甲酯(MMS)處理。MMS的處理結(jié)果表明，各個(gè)時(shí)相的細(xì)胞周期進(jìn)程均發(fā)生延遲或阻

2、滯，其中S期細(xì)胞對(duì)藥物最為敏感。進(jìn)一步分子機(jī)理研究表明，三個(gè)時(shí)相中ATM-Chk2和p38 MAPK通路均被激活，但是檢查點(diǎn)激酶1(Chk1)僅在S期中被活化，提示Chk1特異地參與了S期的DNA損傷檢查點(diǎn)(DNA damage checkpoint)或者DNA復(fù)制檢查點(diǎn)(DNA replication checkpoint)的作用。為了進(jìn)一步確定Chk1在S期檢查點(diǎn)中的功能，我們用專(zhuān)一的小分子抑制劑抑制Chk1的磷酸化，發(fā)現(xiàn)被MMS處

3、理的S期細(xì)胞能在未完成復(fù)制的情況下進(jìn)行異常的有絲分裂；提示Chk1主要是在HeLa細(xì)胞S期的DNA損傷檢查點(diǎn)而不是DNA復(fù)制檢查點(diǎn)發(fā)揮其作用。我們還檢查了參與G2/M期進(jìn)程的cyclin B1的表達(dá)變化情況，在MMS處理的S期細(xì)胞中cyclin B1表達(dá)量不能上調(diào)，而在加入Chk1抑制劑處理后，cyclinB1則有所增加。這一結(jié)果進(jìn)一步支持DNA損傷S期細(xì)胞在Chk1失活時(shí)進(jìn)入異常有絲分裂的推論。我們的研究結(jié)果表明，Chk1是MMS誘發(fā)