愛普菌素殘留檢測方法及其在牛體內(nèi)的消除規(guī)律和預(yù)測模型研究.pdf

1、愛普菌素(Eprinomeetin，EPR)是一種新開發(fā)出來的阿維菌素類藥物，主要用于防治畜類(特別是產(chǎn)乳期)的線蟲、虱、螨、蠅等各種內(nèi)外寄生蟲，具有高效、廣譜、低殘留等特點(diǎn)。有關(guān)其注射劑方面的研究報道很少。本課題擬開展EPR注射劑在靶動物體內(nèi)的安全性、生物樣品中EPR殘留檢測方法以及殘留消除規(guī)律及預(yù)測模型研究，同時提出EPR注射劑臨床給藥后?？墒辰M織的休藥期。 在靶動物安全性試驗(yàn)中，牛頸部皮下單次注射EPR注射劑0.5 mg/

2、kg～2.5 mg/kg，比較給藥前和在給藥后不同時間點(diǎn)血液常規(guī)和生化指標(biāo)的差異。血液常規(guī)指標(biāo)中除白細(xì)胞計數(shù)(WBC)、血小板計數(shù)(PLT)隨劑量的增加均呈下降趨勢外，僅在高劑量組中，血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)等指標(biāo)有升高的趨勢。其他指標(biāo)紅細(xì)胞計數(shù)(RBC)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量(MCH)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)差異均不顯著(P>0.05)。血清生化指標(biāo)谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天

3、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總蛋白(TPRO)、白蛋白(ALB)、尿素氮(UN)、肌酐(CRE)、血糖(GLU)、堿性磷酸酶(ALP)、鈣粒子(CA++)、無機(jī)磷離子(I PHOS)、總膽紅素(T BILl)、直接膽紅素(D BILI)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LD)等均在正常值范圍內(nèi)，差異均不顯著(P>0.05)。此外，動物給藥后進(jìn)食和行動正常，呼吸和排泄未見異常，未觀察到任何不良反應(yīng)。即使在2.5

4、 mg/kg高劑量組，動物都表現(xiàn)出很好的耐受性。 研究建立了牛血液、尿液、糞便和毛發(fā)中EPR殘留HPLC-FLD檢測方法。血液中EPR殘留檢測限和定量限分別為0.05 ng·mL<'-1>和0.2 ng·m<'-1>，添加0.2 ng·mL<'-1>～100 ng·mL<'-1>，批內(nèi)平均回收率范圍在91.5％～99.6％之間，批內(nèi)變異系數(shù)范圍在2.0％～4.3％之間：批間平均回收率范圍在91.4～98.1％之間，批間變異系數(shù)范

5、圍在2.7％～4.6％之間。尿液中EPR殘留檢測限和定量限分別為0.5 ng·mL<'-1>和2.0 ng/·mL<'-1>，添加2 ng·mL<'-1>～100 ng·mL<'-1>，批內(nèi)平均回收率范圍在87.9％～91.5％之間，批內(nèi)變異系數(shù)范圍在5.4％～10.2％之間：批間平均回收率范圍在82.2％～86.5％之間，批間變異系數(shù)范圍在7.8％～11.5％之間。糞便中EPR殘留檢測限和定量限分別為1.0 ng·g<'-1>和2.0

6、 ng·g<'-1>，添加2 ng·g<'-1>～100ng·g<'-1>，批內(nèi)平均回收率范圍在78.6％～86.3％之間，批內(nèi)變異系數(shù)范圍在1.4％～7.2％之間；批間平均回收率范圍在79.6％～87.3％之間，批間變異系數(shù)范圍在6.3％～7.8％之間。毛發(fā)中EPR殘留檢測限和定量限分別為1.0 ng·g<'-1>和2.0 ng·g<'-1>。添加2 ng·g<'-1>～100 ng·g<'-1>，批內(nèi)平均回收率范圍在99.2％～10

7、7.3％之間，批內(nèi)變異系數(shù)范圍在8.9‰～11.2％之間；批間平均回收率范圍在94.6％～100.2％之間，批間變異系數(shù)范圍在10.6％～14.5％之間。 研究建立了牛肌肉、肝臟、腎臟和脂肪組織中EPR殘留HPLC-FLD檢測方法。檢測限和定量限均分別為1 ng·g<'-1>和2 ng·g<'-1>。牛肌肉、肝臟、腎臟和脂肪組織在2 ng·g<'-1>、20 ng·g<'-1>、50 ng·g<'-1>和100 ng·g<'-1

8、>4個添加水平，批內(nèi)平均回收率范圍在70.5％～89.3％之間，批內(nèi)變異系數(shù)范圍在4.5％～9.3％之間：批間平均回收率范圍在72.5％～88.5％之間，批間變異系數(shù)范圍在5.6‰～11.4％之間。肌肉和肝臟中EPR殘留檢測方法經(jīng)不同實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證復(fù)核，添加10 ng·g<'-1>和50 ng·g<'-1>，回收率均大于80％，變異系數(shù)均小于15％。結(jié)果表明方法滿足殘留分析的要求，可用于實(shí)際樣品的檢測。 還進(jìn)行了EPR注射劑在牛體內(nèi)

9、的藥代動力學(xué)、休藥期和殘留預(yù)測模型研究。牛頸部皮下單次注射EPR注射劑0.5 mg/kg，在不同時間點(diǎn)采集血液、尿液、糞便、毛發(fā)以及可食組織(注射部位組織、肌肉、肝臟、腎臟和脂肪)等樣品進(jìn)行殘留檢測，在尿液和毛發(fā)中幾乎檢測不到EPR殘留，糞便和肝臟EPR殘留濃度最高，這表明EPR主要經(jīng)肝臟代謝，隨糞便排出。采用3P97藥代動力學(xué)軟件對殘留濃度．時間數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，血液、糞便、注射部位、肝臟中MR殘留濃度變化符合二室開放模型，肌肉、腎臟、脂

10、肪中EPR殘留濃度變化符合一室開放模型。EPR經(jīng)皮下注射后達(dá)峰時間(T<,max>)較快，均小于1d(0.17 d～0.96 d)，達(dá)峰濃度(C<,max>)范圍在37.32ng·g<'-1>～1453.79 ng·g<'-1>之間。平均駐留時間(MRT)范圍在7.54 d～14.79 d之間，與消除半衰期(T<,1/2el>)范圍2.91 d～19.50 d相一致，說明藥物在動物體內(nèi)消除緩慢。曲線下面積(Auc)范圍為235.36ng

11、·d·g<'-1>～2330.34 ng·d·g<'-1>，從小到大依次為肌肉、血液、脂肪、注射部位、腎臟、糞便和肝臟。采用歐盟官方方法統(tǒng)計分析，注射部位肌肉組織休藥期為27.48 d，其他部位肌肉組織(胸部、腹部、腿部)休藥期為4.10 d，肝臟組織休藥期為7.07 d，腎臟組織休藥期為8.31 d，脂肪組織休藥期為7.04 d。注射部位肌肉組織休藥期明顯高于其他組織(P<0.01)。 采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件，以消除

12、相血液中EPR殘留為自變量擬合的預(yù)測模型回歸方程，R<'2>均大于0.9，方程擬合度經(jīng)F檢驗(yàn)，P值均小于0.001；以消除相糞便中EPR殘留為自變量擬合的預(yù)測模型回歸方程，R<'2>均大于0.8，方程擬合度經(jīng)F檢驗(yàn)，P值均小于0.001，說明回歸方程具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義，這同時也揭示了血液或糞便中EPR殘留與可食組織中的殘留具有很強(qiáng)的相關(guān)性，建立的殘留預(yù)測模型經(jīng)進(jìn)一步驗(yàn)證后可在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用，為臨床合理用藥和屠宰加工，以及保護(hù)動物福利和