Treg-Th17和Tfh細(xì)胞在骨髓衰竭性疾病中變化的意義.pdf

1、目的：
　　 (1)檢測骨髓增生異常綜合征(MDS)、再生障礙性貧血(AA)和免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少癥(IRH患者骨髓中CD4+T細(xì)胞中Foxp3和RORγt的表達(dá)水平；分析調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)、Th17細(xì)胞和Treg/Th17在這些疾病中變化的意義。
　　 (2)檢測IRH患者骨髓中CD4+T細(xì)胞中Bcl-6的表達(dá)水平，分析濾泡輔助性T細(xì)胞(Tfh)在IRH患者中變化的意義。
　　 方法：
　　 (1

2、)收集2011年1月-2012年3月在蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院門診或住院病房二系或三系血細(xì)胞減少患者和缺鐵性貧血(IDA)患者骨髓10ml，肝素抗凝。IDA患者作為正常對照組。
　　 (2)密度梯度離心分離骨髓單個核細(xì)胞(BMMNC)，免疫磁珠分選CD4+T細(xì)胞。抽提CD4+T細(xì)胞中的總mRNA并逆轉(zhuǎn)成cDNA，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(QRT-PCR)（TagMan）檢測Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Foxp3，Th17細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子RO

3、Rγt，以及Tfh細(xì)胞主要轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6的mRNA表達(dá)水平。
　　 (3)收集所有患者的病史和臨床資料，對疾病進行明確診斷。
　　 (4)在MDS患者中，采用直線回歸分析方法分析Treg、Th17細(xì)胞和Treg/Th17與骨髓原始細(xì)胞比例之間的相互關(guān)系。
　　 (5)采用兩樣本均值比較的t檢驗分析AA和IRH患者與正常對照組之間Treg/Th17的差異。
　　 (6)采用兩樣本均值比較的t檢驗分析IR

4、H和正常對照組之間Bcl-6表達(dá)的差異。
　　 結(jié)果：
　　 (1)MDS患者中，Treg/Th17與骨髓原始細(xì)胞比例高度相關(guān)(r=0.793)。
　　 (2)MDS患者中，骨髓原始細(xì)胞≥5％的MDS患者Th17細(xì)胞水平明顯低于＜5%的患者(p=0.007)。
　　 (3)難治／復(fù)發(fā)AA患者的Treg/Th17明顯低于正常對照組和初診AA組(p=0.006;p＜0.001)。
　　 (4)IRH組

5、，Tfh細(xì)胞高于正常對照組(p=0.016)，Treg/Th17高于正常對照組(p=0.045)；
　　 (5)IRH組11117細(xì)胞明顯低于AA組(p＜0.001);Treg/Th17明顯高于AA組(p=0.002)。
　　 結(jié)論：
　　 (1)MDS患者，Treg/Th17和骨髓原始細(xì)胞高低正相關(guān)，提示Th17細(xì)胞免疫功能受抑與MDS疾病的進展有關(guān)。
　　 (2)難治／復(fù)發(fā)AA患者，Treg/Th17