禽多殺性巴氏桿菌PlpB基因克隆、表達及表達蛋白生物學特性研究.pdf

1、本研究針對禽多殺性巴氏桿菌PlpB基因的克隆、表達及其表達產(chǎn)物的初步應用開展了以下工作。 1．多殺性巴氏桿菌PipB基因的克隆與高效表達。 參照GenBank已發(fā)表的PM70菌株的PlpB基因序列，設計PMC48-1菌株的PIpB一對寡核苷酸引物。以本實驗室保存的C48-1菌株為實驗材料，用PCR的方法成功擴增PlpB基因的全序列，該片段共831bp包含一個完整的編碼框。將擴增基因插入原核表達載體pGEX-KG，成功構(gòu)建

2、了重組表達質(zhì)粒pKG-PlpB，并對pKG-PlpB重組表達質(zhì)粒進行序列測定，結(jié)果表明：擴增序列與GenBank上所報道的PM70株的PlpB基因序列核苷酸同源性在99％以上。將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞，經(jīng)誘導獲得大小約56KDa的表達蛋白(命名為ppB)。Western blot檢測表明，該表達蛋白具有良好的反應原性。 2．多殺巴氏桿菌PipB表達蛋白免疫保護作用初步研究。 以表達蛋白ppB乳

3、化后免疫小鼠，連續(xù)免疫3次，第一次間隔14d，第二次間隔7d，并用瓊脂雙向擴散試驗檢測血清抗體效價。結(jié)果，ppB蛋白的抗血清效價達1/16；采免疫小鼠血清注入非免疫小鼠體內(nèi)，同時進行主動及被動免疫保護試驗，結(jié)果表明，所構(gòu)建的原核表達重組質(zhì)粒pKG-PlpB在大腸桿菌BL21融合表達的蛋白ppB能誘導小鼠產(chǎn)生免疫反應，可保護小鼠抵抗強毒的攻擊，這種免疫保護作用也可通過血清被動傳遞給非免疫小鼠，使后者獲得對強毒的抵抗力。 本研究是國