一種水稻內(nèi)源蛋白的抗RSV病毒機制研究.pdf

1、水稻條紋葉枯病是由纖細病毒屬(Tenuivirus)的代表種--水稻條紋病毒(Rice stripe virus, RSV)引起的一種嚴重的水稻病毒病害(Murphy F,1995)。該病自2004年從我國爆發(fā)以來，已經(jīng)造成至少20個省市水稻減產(chǎn)，這些病害給百姓造成重大損失。對于水稻條紋葉枯病的防控，可從植物自身的抗病基因和病毒的基因兩方面進行考慮。本研究采用植物自身的抗病基因WRKY蛋白來篩選抗性植株。
　　運用實時熒光定量PC

2、R（Real Time PCR）技術(shù)檢測了WRKY21和WRKY70基因mRNA分別在健康日本晴水稻和RSV侵染后表達情況。結(jié)果表明，相比健康水稻，WRKY21 mRNA上調(diào)了1.5倍，WRKY70 mRNA上調(diào)了3倍。為進一步研究WRKY21和WRKY70在水稻抗病中的作用，將過表達WRKY21和WRKY70轉(zhuǎn)基因水稻分別接種RSV檢測mRNA表達情況，WRKY21 mRNA上調(diào)了2.5倍， WRKY70 mRNA上調(diào)了5倍。

3、　　對WRKY21和WRKY70兩個基因T1代和T2代水稻植株進行潮霉素篩選陽性植株并且利用Southern雜交的方法對目的基因進行鑒定。潮霉素初步鑒定表明：WRKY21 T1、T2代14株中陽性植株分別為9株和8株，WRKY70 T1、T2代14株中陽性植株分別為8株和11株，通過T1代Southern雜交分別篩選出7株和4株單拷貝植株。為了保證傳毒效率，對帶毒灰飛虱進行帶毒率檢測，測得其帶毒率為80%左右。利用帶毒灰飛虱進行接種實驗

4、，飼毒3d后滅蟲，將植株移植大田正常水肥管理。對于獲得的轉(zhuǎn)基因陽性植株及其后代（T1、T2代）接種RSV后20-60d后做抗病性調(diào)查。參照抗性評價標準抗病性調(diào)查表明，WRKY21轉(zhuǎn)基因T1代、T2代為中感植株，WRKY70轉(zhuǎn)基因T1代、T2代為中抗植株。與未轉(zhuǎn)基因相比，WRKY70過表達植株發(fā)育較遲緩，發(fā)病癥狀較輕或者不發(fā)病。通過 T1代、T2代的連續(xù)抗病性調(diào)查結(jié)果表明 T1代植株RSV抗性可以遺傳給T2代植株。WRKY21 T1代、T