灰飛虱唾液腺中與水稻條紋葉枯病毒(RSV)傳播相關(guān)蛋白的研究.pdf

1、灰飛虱Laodelphax striatellus（半翅目飛虱科）是亞洲地區(qū)水稻上的重要害蟲。它不僅刺吸水稻汁液造成危害，更重要的是傳播水稻條紋葉枯病毒(Rice sripe virus，RSV)造成水稻條紋葉枯病的流行。RSV是纖細(xì)病毒屬代表成員，由灰飛虱以循回增殖型方式經(jīng)卵傳播。介體灰飛虱從感染植株吸食獲毒后，RSV從腸壁內(nèi)腔擴(kuò)散到血淋巴及其它組織，最后到達(dá)唾液腺，在介體昆蟲取食時(shí)又被傳至植株。唾液腺是RSV傳播需要克服的最后一道屏

2、障，而RSV克服唾液腺屏障的機(jī)制缺乏研究。前期的研究發(fā)現(xiàn)，帶毒灰飛虱唾液腺中α-亞基-ATP合酶(ATP synthase subunit alpha)、微管蛋白-a-2(Tubulin alpha-2)、蘋果酸脫氫酶(NADP-dependent malic enzyme)、線粒體內(nèi)膜移位酶(Mitochondrial import innermembrane translocase)及泛素-60s核糖體L40前體(Ubiquitin

3、-60S ribosomal protein L40precursor)等5個(gè)蛋白的表達(dá)水平顯著高于無毒灰飛虱唾液腺。本論文研究了蘋果酸脫氫酶、線粒體內(nèi)膜移位酶及泛素-60s核糖體L40前體等3個(gè)唾液腺差異蛋白的氨基酸全長序列及基因表達(dá)，并用RNA干擾研究了α-亞基-ATP合酶、微管蛋白-α-2、線粒體內(nèi)膜移位酶基因?qū)SV傳播的影響。主要結(jié)果如下:
　　(1)利用克隆與RACE技術(shù)，從帶RSV的灰飛虱體內(nèi)成功擴(kuò)增出2060 bp

4、的蘋果酸脫氫酶、661 bp線粒體內(nèi)膜移位酶及1167bp的泛素-60s核糖體L40前體的的核苷酸全長序列。將全長核苷酸序列提交到NCBI的GenBank數(shù)據(jù)庫中，分別命名為LsNADP、LsMIT及LsUBI。采用實(shí)時(shí)定量PCR的方法對(duì)LsNADP、LsMIT及LsUBI基因表達(dá)進(jìn)行相對(duì)定量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)帶毒灰飛虱唾液腺和全身中這3個(gè)基因的表達(dá)均顯著上調(diào)。與不帶毒灰飛相比，帶毒灰飛虱唾液腺中LsNADP基因、LsMIT基因及LsUBI的相

5、對(duì)表達(dá)量分別提高了17.4％、123.6％和62.2％。LsNADP、LsMIT和LsUBI基因在帶RSV灰飛虱蟲體中的相對(duì)表達(dá)量較無毒灰飛虱分別提高了25.0％、43.4％和16.7％。
　　(2)采用RNAi研究了α-亞基-ATP合酶(LsATP)、線粒體內(nèi)膜移位酶基因(LsMIT)、微管蛋白-α-2(LsTUB)對(duì)灰飛虱傳播RSV的影響。取食了含dsRNA的人工飼料后，灰飛虱中LsATP、LsMIT、LsTUB的相對(duì)表達(dá)分別