兩種殺蟲劑對灰飛虱傳毒力與條紋病毒RSV致害力影響的初步研究.pdf

1、針對本世紀初灰飛虱(Laodelphax striatellus(Fallén))傳播條紋病毒(rice stripe virus，RSV)引起的水稻條紋葉枯病嚴重發(fā)生和化學殺蟲劑的大量使用，本論文選擇了在生產(chǎn)上普遍使用、但作用機制不同的兩種殺蟲劑—吡蟲啉(imidacloprid)和噻嗪酮(buprofezin)，研究其對灰飛虱傳毒能力的影響，以及稻苗受其脅迫后，其體內(nèi)RSV致害力的變化。室內(nèi)用殺蟲劑分別對帶毒和不帶毒灰飛虱群體進行毒

2、力測定，再以不同濃度處理帶毒灰飛虱群體一定時間(8h、12h和24h)后，以real-time PCR方法檢測其傳毒能力、ELISA與斑點免疫結(jié)合法檢測其帶毒率和(24h)泌露量的變化;室外由帶毒灰飛虱群體（帶毒率為92％）刺吸秧苗，48h后移除蟲源，后對稻苗以殺蟲劑常規(guī)劑量（有效成分分別為吡蟲啉100mg/L、噻嗪酮250mg/L）分別施藥1、2、3和4次（分別以B1、B2、B3、B4和S1、S2、S3、S4表示），以灰飛虱正常侵害、

3、噴施清水的處理為對照，移栽后分期采樣，以real-time PCR方法檢測了6種RSV編碼基因的相對表達量、以WB方法（Western blotting，免疫印跡檢測）測定SP蛋白含量。主要研究結(jié)果如下:
　　1.兩種藥劑對帶毒和不帶毒灰飛虱群體(48h)的毒力測定結(jié)果表明，不帶毒灰飛虱群體對兩種殺蟲劑的耐受力遠高于帶毒灰飛虱群體。以LC50為參數(shù)，不帶毒灰飛虱群體()對吡蟲啉和噻嗪酮的耐受力（LC50分別為2037.03mg/L

4、和859.85mg/L）分別是帶毒群體(LC50分別為97.73mg/L和71.99mg/L)的20.84倍和11.94倍。
　　2.帶毒灰飛虱群體以兩種殺蟲劑不同濃度分別處理8h、12h和24h后，轉(zhuǎn)移至健株上傳毒48h，檢測稻株體內(nèi)的CP(coat protein)和SP(special protein)相對表達量，以此分析藥劑脅迫對灰飛虱傳毒力的影響。結(jié)果顯示:吡蟲啉和噻嗪酮脅迫處理灰飛虱8h和12h，絕大多數(shù)處理的CP被誘

5、導表達上調(diào)，其中吡蟲啉4個處理(8h的20mg/L、30mg/L和12h的10mg/L、40mg/L)和噻嗪酮1個處理（8h的10mg/L）的CP的表達水平都顯著高于對照，其他處理與對照無顯著差異;兩種殺蟲劑脅迫帶毒灰飛虱24h，CP的相對表達量明顯下降，所有處理幾乎都沒有表達;SP的表達模式與CP基本一致。這說明帶毒灰飛虱經(jīng)低劑量的藥劑脅迫后，短時間內(nèi)其傳毒能力增強，但隨時間延長傳毒力下降。
　　3.吡蟲啉和噻嗪酮脅迫帶毒灰飛虱

6、群體24h后的泌蜜量測定結(jié)果顯示，在吡蟲啉濃度＜30mg/L時促進灰飛虱的取食，而吡蟲啉濃度＞70mg/L和噻嗪酮≥20mg/L對灰飛虱的泌露量有較強的抑制作用，表明低濃度的吡蟲啉處理刺激灰飛虱的取食為害。
　　4.吡蟲啉和噻嗪酮的脅迫對RSV侵染稻株體內(nèi)NS2、NS3、NSvc2和NSvc4基因的表達模式都有明顯影響，且一些處理的基因表達水平與同期對照差異顯著:(1)吡蟲啉脅迫處理稻株在接蟲后16、19和21天，上述基因表達特征

7、不一致，表現(xiàn)為:NS2表達各處理顯著抑制或與CK持平;NSvc2表達在接蟲后16天即被B4處理強烈誘導，轉(zhuǎn)錄水平為對照的336.45倍，其他處理則與對照持平;NSvc4接蟲后16天受B1和B4處理的強烈誘導，表達水平分別為對照的103.65倍和229.12倍，其他處理都受到顯著抑制。接蟲后24天，上述四種基因都有個別處理（四種基因的B1處理、NS2和NSvc2的B4處理和NS3的B2處理）被誘導表達上調(diào)而顯著高于對照;(2)噻嗪酮對上述

8、四種基因表達模式的影響呈現(xiàn)一定的規(guī)律性，表現(xiàn)為:基因表達水平在接蟲后16天被抑制、之后個別基因被誘導表達、接蟲后21天再被抑制、接蟲后24天個別基因被再次誘導。其中NS2和NS3基因表達模式相似，而NSvc2則與NSvc4一致。
　　5.受RSV侵染稻株體內(nèi)CP基因和SP基因的表達模式亦受吡蟲啉和噻嗪酮的脅迫影響，且表達特征類似。具體表現(xiàn)為:(1)CP基因的(B4，16d)（即接蟲后16天的B4處理，下同）、(B1，24d)和(B

9、4，24d)被誘導表達而顯著高于對照，其中(B4，16d)基因表達水平為對照的46.27倍;SP基因被(B1，16d)和(B4，16d)強烈誘導，達到表達高峰，轉(zhuǎn)錄水平分別為其同期對照的245.02倍和691.41倍;接蟲后19和21天，CP和SP的所有處理都與對照持平或被顯著抑制。(2)RSV侵染稻株在噻嗪酮脅迫下，接蟲后16、19和21天，CP基因和SP基因表達水平除(S3，19d)（接蟲后19天的S3處理，下同）被誘導表達上調(diào)而顯

10、著高于CK外，其他所有處理始終受到顯著抑制;(S1，24d)和(S2，24d)的CP和SP表達水平顯著高于對照，而(S3，24d)和(S4，24d)則變化不明顯。
　　6.吡蟲啉和噻嗪酮脅迫下，RSV侵染稻株體內(nèi)的SP蛋白含量較同期CK有所變化。表現(xiàn)為:(1)接蟲后16天吡蟲啉所有處理的SP蛋白量遠低于同期對照，但之后被誘導上調(diào)，接蟲后19、21和24天，B2、B3和B4處理與對照接近，而B1處理始終高于對照，曾達到CK的507.