兩種重要新型魚類病毒（SGIV和SVCV-A1）基因組與部分功能基因的研究.pdf

1、新加坡石斑魚虹彩病毒(Singapore grouper：iridovirus，SGIV)和鯉春病毒血癥病毒亞洲I型(Spring viraemia ofcarp virus-Asia 1，SVCV-A1)是近年來(lái)新出現(xiàn)的兩種嚴(yán)重的魚類傳染性病毒，可以感染多種經(jīng)濟(jì)魚類，致使魚類大面積死亡，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前尚不清楚這兩種病毒感染和致病的分子機(jī)理，缺乏有效的辦法對(duì)病毒進(jìn)行防治。因此，在基因和分子水平上研究這兩種病毒顯得尤為必要。

2、 (一)SGIV轉(zhuǎn)錄組學(xué)本論文根據(jù)全基因組序列信息，成功構(gòu)建了包含SGIV 162個(gè)ORFs在內(nèi)的全基因組DNA芯片，并運(yùn)用DNA microarray技術(shù)完成了SGIV體外感染石斑魚脾細(xì)胞(GS)和體內(nèi)感染石斑魚脾組織的轉(zhuǎn)錄圖譜，初步界定出SGIV三類不同表達(dá)時(shí)相的轉(zhuǎn)錄本。此后，采用Real-time RT-PCR、RT-PCR和dilution RT-PCR等技術(shù)驗(yàn)證了芯片數(shù)據(jù)的可靠性和可重復(fù)性。研究表明：絕大部分基因在體外感

3、染48小時(shí)和體內(nèi)感染4天時(shí)高表達(dá)；SGIV基因在體內(nèi)體外感染過(guò)程中的轉(zhuǎn)錄模式有很大的差異，體內(nèi)感染的轉(zhuǎn)錄模式更為復(fù)雜，可能是受到了宿主抗病毒免疫系統(tǒng)的作用；共有15個(gè)極早期(IE)、89個(gè)早期(E)和53個(gè)晚期(L)轉(zhuǎn)錄本得到了界定；在體外培養(yǎng)細(xì)胞中，病毒的復(fù)制周期約為48小時(shí)；在魚體感染組織中，宿主可能主要通過(guò)抑制與病毒復(fù)制有關(guān)的E期轉(zhuǎn)錄本來(lái)破壞病毒的復(fù)制機(jī)制，從而產(chǎn)生免疫清除效應(yīng)。 (二)SGIV誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在SGIv轉(zhuǎn)錄

4、組學(xué)研究的基礎(chǔ)上，對(duì)SGIv誘導(dǎo)的宿主細(xì)胞凋亡進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SGIv誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有時(shí)間依賴性、病毒感染強(qiáng)度依賴性和細(xì)胞特異性。凋亡的發(fā)生無(wú)需病毒的復(fù)制，但病毒編碼的與凋亡相關(guān)的蛋白起著重要的調(diào)控作用。通過(guò)對(duì)病毒card(Caspase activation and recruitment domain)和bak基因功能的研究發(fā)現(xiàn)，外源性card或bak基因過(guò)表達(dá)后都能誘發(fā)細(xì)胞凋亡，且這兩種基因可能通過(guò)Caspase-

5、9協(xié)同作用。中和實(shí)驗(yàn)表明，CA：RD蛋白可能發(fā)揮免疫逃避作用，有利于病毒的復(fù)制和增殖。RNAi實(shí)驗(yàn)表明，siRNA可以通過(guò)特異性地抑制bak基因而部分地抑制由病毒引起的細(xì)胞凋亡，但不能抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生，且對(duì)病毒的復(fù)制和增殖無(wú)顯著影響。 (三)SVCV-A1全基因組序列分析首次完成了SVCV-A1全基因組序列的測(cè)定、基因詮釋和分析。通過(guò)遺傳進(jìn)化分析，證實(shí)了SVCV-A1是彈狀病毒科水泡病毒屬的新成員，屬于SVCV的Ia亞群。