應(yīng)用PCR—RFLP技術(shù)鑒別肉制品中的原料肉種類.pdf

1、本研究利用聚合酶鏈式反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)和限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)(restriction fragment length polymorphism，RFLP)，以市場上常見的牛肉、豬肉、雞肉、羊肉等及其制品為材料，擴增出相關(guān)目的基因，并對擴增產(chǎn)物進行RFLP分析，以確定生肉和肉制品中原料肉的種類，旨在探索一種操作簡便、快捷準確、成本低廉的肉品質(zhì)量檢測新技術(shù)。具體研究和結(jié)果如下： 1

2、．肉制品中牛源性成分的檢測：提取出豬、牛、羊、雞、鴨、兔、魚7種生肉和市售牛肉干、牛肉棗、牛肉火腿腸及高壓牛肉中的DNA。將生牛肉作為陽性對照，四種牛肉制品作為待測樣品，其余動物樣品作為陰性對照首先進行線粒體DNA通用引物(Cytb1/Cytb2)的擴增，檢測PCR的準確性和模板的提取質(zhì)量。其后對11種樣品進行牛特異性引物擴增，結(jié)果引物擴增特異性良好，待測樣品均擴增出清晰明亮條帶，陰性對照無條帶。最后，對特異性擴增的陽性結(jié)果進行Mbo

3、Ⅰ的限制性酶切確認，避免結(jié)果的假陽性，表明無假陽性產(chǎn)物。此法可準確鑒別制品中的牛源性成分。 2．肉制品中豬源性成分的檢測：從豬、牛、羊、雞、鴨、兔6種生肉和高壓豬肉、豬肉火腿腸、豬肉棗、豬肉松及牛肉干、牛肉棗、牛肉火腿腸7種制品中提取出DNA。將生豬肉作為陽性對照，四種豬肉制品作為待測樣品，其余動物樣品作為陰性對照進行線粒體DNA通用引物(Cytb1/Cytb2)的擴增，樣品均擴增出清晰明亮的359bp大小的條帶；然后用Alu

4、Ⅰ對所有結(jié)果進行限制性酶切，其中豬源性成分產(chǎn)生244 bp和115 bp 2個片段，牛源性成分產(chǎn)生190 bp和169 bp 2個片段，其余動物樣品不產(chǎn)生切割。豬、牛片段的差異可通過電泳辨別出來。由此可檢測出食品中的豬源性成分，同時此法還可同時鑒別出肉制品中的豬和牛源性成分。 3．肉制品中羊源性成分的檢測：提取出豬、牛、羊、雞、鴨、兔、魚7種生肉和油炸羊肉、水煮羊肉、烤羊肉串及高壓羊肉制品中的DNA。將生羊肉作為陽性對照，四種羊

5、肉熟制品作為待測樣品，其余動物樣品作為陰性對照首先進行線粒體DNA通用引物(Cytb1/Cytb2)的擴增，檢測PCR的準確性和模板的提取質(zhì)量。其后對11種樣品進行羊特異性PCR擴增，結(jié)果引物擴增特異性良好，待測樣品均擴增出清晰明亮條帶，陰性對照無條帶。最后，對特異性擴增的陽性結(jié)果進行Sau3A Ⅰ的限制性酶切確認，避免結(jié)果的假陽性，表明無假陽性產(chǎn)物。此法可準確鑒別制品中的羊源性成分。 4．肉制品中雞源性成分的檢測：提取出豬、牛

6、、羊、雞、鴨、兔、魚7種生肉和紅燒雞翅、烤雞肉、雞肉火腿腸及高壓雞肉中的DNA。將生雞肉作為陽性對照，四種雞肉制品作為待測樣品，其余動物樣品作為陰性對照首先進行線粒體DNA通用引物(Cytb1/Cytb2)的擴增，檢測PCR的準確性和模板的提取質(zhì)量。其后對11種樣品進行雞特異性PCR擴增，結(jié)果引物擴增特異性良好，待測樣品均擴增出清晰明亮條帶，陰性對照無條帶。最后，對特異性擴增的陽性結(jié)果進行Hind Ⅲ的限制性酶切確認，避免結(jié)果的假陽性，