靈芝生物富硒及富硒靈芝硒蛋白的分離純化和抗氧化性研究.pdf

1、靈芝是中國(guó)傳統(tǒng)的藥食珍品,硒則是人體的必需微量元素,以靈芝子實(shí)體進(jìn)行生物富硒的研究,國(guó)外未有報(bào)導(dǎo),國(guó)內(nèi)也較少見(jiàn)而且尚待深入.因此,該實(shí)驗(yàn)對(duì)填補(bǔ)基礎(chǔ)領(lǐng)域研究的空白、探索應(yīng)用領(lǐng)域新的補(bǔ)硒資源和更有效的生物活性因子有著重要的意義.該論文的主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:培養(yǎng)基中硒的濃度為200~250μg/g時(shí),可以獲得產(chǎn)量及富硒量較為理想的富硒靈芝子實(shí)體;硒可以明顯提高靈芝中多糖、蛋白質(zhì)以及氨基酸的含量,但并不改變靈芝蛋白質(zhì)的分布和蛋白質(zhì)中氨基酸的組成配

2、比;礦質(zhì)元素中硒有極明顯的增加,銅、鉬等有一定量的增加,而鐵、鈣、鍶等則有所下降.在富硒靈芝子實(shí)體中,80﹪以上的硒以有機(jī)硒形式存在,并主要以非硒代蛋氨酸(硒代半胱氨酸)的形式與蛋白質(zhì)結(jié)合,其中水溶性蛋白和堿溶性蛋白是靈芝結(jié)合硒的主要蛋白,總結(jié)合硒量占蛋白硒的75﹪以上;此外,應(yīng)用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離富硒靈芝子實(shí)體中的含硒蛋白組分,并采用氫化物原子熒光法(HGAFS)測(cè)定蛋白或肽鏈條帶中硒的含量,結(jié)果表明:

3、在分辨出的13條蛋白條帶中,分子量在8.709~142.53kDa的蛋白或肽鏈均結(jié)合了不同程度的硒,但硒主要分布在分子量不超過(guò)16kDa的蛋白或肽鏈中.富硒靈芝堿溶性蛋白的等電點(diǎn)初步確定在pH 4.2左右,抗氧化活性在60℃以下穩(wěn)定,蛋白先經(jīng)過(guò)葡聚糖凝膠(Sephadex G-100)分子篩層析,更進(jìn)行強(qiáng)陰離子交換樹(shù)脂(Biorad High Q)離子交換層析后,所獲得的富硒靈芝含硒蛋白結(jié)合的硒量最高,每克蛋白含硒可高達(dá)5.48mg.順

4、磁共振自旋捕集技術(shù)(EPR)和CuSO<,4>-Phen-Vc-H<,2>O<,2>-DNA體系微弱發(fā)光法清除羥自由基(·OH)和超氧自由基(O<,2><'->·)的實(shí)驗(yàn)以及抗DNA損傷作用的研究發(fā)現(xiàn),富硒靈芝蛋白和富硒靈芝多糖均具有較強(qiáng)地清除·OH和O<,2><'->的活性,抗氧化作用強(qiáng)于對(duì)照—普通靈芝蛋白和普通靈芝多糖;硒與靈芝蛋白之間具有抗氧化協(xié)同作用,但硒與靈芝多糖以及靈芝蛋白與靈芝多糖之間則無(wú)此協(xié)同作用但卻可以彼此增強(qiáng)抗氧化的

5、活性;富硒靈芝蛋白為兼型抗氧化劑,能明顯抑制和延遲DNA的氧化損傷發(fā)光,而且蛋白濃度與延遲時(shí)間之間存在著顯著的線性依賴關(guān)系.此外,大鼠紅細(xì)胞生物模型實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明,富硒靈芝蛋白能夠劑量依賴性地抑制過(guò)氧化特丁烷(TBHP)引起的大鼠紅細(xì)胞溶血、減少紅細(xì)胞過(guò)氧化脂質(zhì)產(chǎn)物—丙二醛(MDA)的生成,以及抑制高鐵血紅蛋白的產(chǎn)生和聚積,保護(hù)紅細(xì)胞中的氧合血紅蛋白免受氧化損傷.綜上所述,富硒靈子實(shí)體是一種理想的補(bǔ)硒資源,其中主要賦存硒的靈芝蛋白更是靈