黃芪、魚腥草、板藍根、香菇多糖體外刺激人肺腺上皮細胞β-防御素-2表達的研究.pdf

1、呼吸道感染一直是威脅人類生命的十大死因之一，尤其是下呼吸道感染對生命的威脅更為嚴重，肺部感染的嚴重程度也隨年齡的增長而加重，預后差，致殘率及病死率高。引起呼吸道感染的病原體主要是細菌、病毒和非典型病原體，而且在下呼吸道感染中，病毒和非典型病原體起著越來越重要的作用。因此，正確、合理、有效的選用抗生素是目前治療呼吸道感染包括肺部感染的主要策略。但是隨著抗生素的廣泛使用，已經(jīng)導致耐藥菌株的不斷出現(xiàn)，并且蔓延。細菌感染對傳統(tǒng)抗生素的耐藥性是嚴

2、重的全球性問題。而對于病毒感染，目前仍然沒有特效藥物。因此，尋找新的抗微生物藥物已經(jīng)十分迫切，其中防御素便成為廣大學者關注的熱點之一。 防御素是一種富含精氨酸的小分子量陽離子抗菌肽，廣泛分布于哺乳動物、昆蟲和植物中，是先天性免疫系統(tǒng)的一部分，在宿主的天然防御機制中起著重要作用，主要包括α和β防御素兩大家族。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)六種人β防御素(human-β-defensin)：HBDl～6，其中人β-防御素-2(HBD-2)主要對革蘭陰

3、性菌(如綠膿桿菌、大腸桿菌等)、真菌(如白色念珠菌)和分枝桿菌具有殺滅作用。HBD-2在皮膚、肺和氣管中呈現(xiàn)固有表達，但在正常情況下其表達量很低，通過前炎癥因子，如脂多糖(LPS)、白介素-1β(IL-1β)和腫瘤壞死因子(TNF-α)刺激后其表達能顯著上調(diào)，而且其誘導性表達在其他組織中也可見。HBD-2是第一種被發(fā)現(xiàn)，通過微生物及前炎癥因子誘導能在轉(zhuǎn)錄水平表達增加的人β防御素，但其被誘導表達的機制仍不十分清楚。 中

4、藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)學中的瑰寶，在古代醫(yī)學和現(xiàn)代醫(yī)學中都發(fā)揮著重要的作用。目前有很多研究表明，黃芪、魚腥草、板藍根和香菇多糖均能刺激IL-1、IL-2和TNF-α等細胞因子的產(chǎn)生，使巨噬細胞作用增強，從而提高機體的免疫力，發(fā)揮抗感染和抗腫瘤作用。 目的：本研究目的旨在探討黃芪、魚腥草、板藍根和香菇多糖體外刺激人肺腺上皮細胞(SPC-A-1)，誘導表達HBD-2基因的情況。并進一步研究該表達是否存在濃度和時間依賴性效應，為進一步在動物水

5、平探討HBD-2的表達和中藥之間的劑量關系提供實驗依據(jù)。 方法：實驗組設置黃芪、魚腥草、板藍根和香菇多糖各5個濃度梯度：12.5、25.0、50.0、100.0及200.0ug／ml；設置IL-1β20ng／ml陽性對照組和空白對照組各一個。分別刺激貼壁生長的SPC-A-1，8小時后提取細胞總RNA，用一步法RT-PCR試劑盒對提取的細胞總：RNA進行RT-PCR，得到特異性產(chǎn)物后，采用瓊脂糖凝膠電泳。不同濃度刺激下誘導的HBD

6、-2mRNA相對表達量用HBD-2的校正光密度值與人β-actin的校正光密度值比表示，從而獲得誘導HBD-2表達的四種最佳中藥濃度。然后以誘導HBD-2表達的最佳藥物濃度在不同的時間點：Oh、1h、2h、4h、8h、16h、24h及48h刺激SPC-A-1細胞，提取細胞總RNA、做R-T-PCR、瓊脂糖電泳，并分析結(jié)果。 結(jié)果：黃芪、魚腥草、板藍根和香菇多糖刺激SPC-A-1細胞8小時后，HBD-2mRNA表達最高的濃度均為1

7、00ug／ml。用最高表達濃度100ug／ml的四種中藥，分別于不同時間點刺激SPC-A-1細胞，發(fā)現(xiàn)HBD-2mRNA表達最高發(fā)生于8小時后。 結(jié)論：本研究應用RT-PCR技術首次證實黃芪、魚腥草、板藍根和香菇多糖可以上調(diào)人肺腺上皮細胞(SPC-A-1)HBD-2mRNA的表達；這種增強表達與藥物的刺激劑量和刺激時間具有一定的相關性，從而證實HBD-2可以被誘導表達增強。說明黃芪、魚腥草、板藍根和香菇多糖等四種中藥的抗感染和免