TNF-α拮抗肽緩釋微球及其長(zhǎng)循環(huán)納米粒的研究.pdf

1、腫瘤壞死因子α（TNF-α）在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、內(nèi)毒性休克等疾病發(fā)生和發(fā)展中起重要作用，并導(dǎo)致較高死亡率。前期研究表明，TNF-α拮抗肽（TNF-BP）生物效應(yīng)明確，有可能成為抗TNF相關(guān)疾病的新型肽類藥物。但是，TNF-BP穩(wěn)定性差、生物半衰期短，難以直接應(yīng)用于臨床。本文分別以乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）和PEG修飾的PLGA（PEG-PLGA)為載體材料，制備了載TNF-BP的PLGA長(zhǎng)效緩釋微球和載TNF-BP的PEG-PLGA長(zhǎng)

2、循環(huán)納米粒，為TNF-BP臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　 ⑴研究了載TNF-BP的PLGA長(zhǎng)效緩釋微球。以TNF-BP為藥物，PLGA為載體，通過二次乳化法制備了TNF-BP長(zhǎng)效緩釋微球，并對(duì)所制得的微球進(jìn)行了表征評(píng)價(jià)。為了篩選配方的最佳條件，在單因素考察的基礎(chǔ)上，通過正交表L16(45)的設(shè)計(jì)試驗(yàn)，考察了不同因素水平對(duì)微球載藥量和包封率的影響。采用光學(xué)顯微鏡、掃描電子顯微鏡、激光散射儀等技術(shù)對(duì)PLGA微球進(jìn)行了

3、表征。對(duì)制備的微球采用冷凍干燥技術(shù)制備TNF-BP 長(zhǎng)效緩釋微球的凍干粉。通過冷凍干燥工藝的研究，評(píng)價(jià)了葡萄糖、蔗糖和甘露醇3種多元醇對(duì)微球冷凍干燥的影響。對(duì)制備的載藥微球進(jìn)行體外釋藥研究，并對(duì)釋藥行為進(jìn)行藥物釋放數(shù)學(xué)模型擬合。
　　 ⑵研究了載TNF-BP的PEG-PLGA長(zhǎng)循環(huán)納米粒。以TNF-BP為藥物，PEG-PLGA為載體，通過溶劑揮發(fā)法制備具有長(zhǎng)循環(huán)效能的TNF-BP長(zhǎng)循環(huán)納米粒，并對(duì)所制得的納米粒進(jìn)行了表征評(píng)價(jià)。為

4、了篩選配方的最佳條件，考察了不同因素對(duì)納米粒粒徑及粒徑分布的影響。采用透射電子顯微鏡、激光散射儀等技術(shù)對(duì)PEG-PLGA納米粒進(jìn)行了表征。對(duì)制備的納米粒進(jìn)行體外釋藥研究，并對(duì)釋藥行為進(jìn)行了藥物釋放數(shù)學(xué)模型擬合。對(duì)制備的載藥納米粒進(jìn)行了初步生物學(xué)效應(yīng)的研究，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)了腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)PEG-PLGA 納米粒的吞噬作用，同時(shí)采用Western-blot 研究了納米粒對(duì)TNF-BP的保護(hù)作用。
　　 ⑶通過以上研究獲得了以下結(jié)

5、果：①通過二次乳化法，采用優(yōu)化后的工藝制備所得PLGA 微球，平均粒徑為(10.23±0.03)μm，平均載藥量為(13.39±0.29)%，平均藥物包封率為(83.54±0.24%)。②冷凍干燥對(duì)微球的形態(tài)和結(jié)構(gòu)都會(huì)產(chǎn)生較大影響，因此必須加入凍干保護(hù)劑。在葡萄糖、蔗糖和甘露醇3種多元醇凍干保護(hù)劑中，3%的甘露醇具有較好的效果。③TNF-BP 微球具有良好的緩釋效果，其體外釋藥行為符合雙相動(dòng)力學(xué)模型方程，回歸方程為：Q=-0.010+3

6、8.856·（1-e-t/0.496）+27.96·（1-e-t/50.004）。④通過溶劑揮發(fā)法采用優(yōu)化后的工藝制備所得PEG-PLGA 納米粒，平均粒徑為(80.8±0.6)nm；粒徑分布為(0.073±0.034)；平均Zeta 電位為(-17.90±1.00)mV；平均載藥量為(1.22±0.15%)；平均藥物包封率為(56.10±7.49)%。⑤PEG-PLGA 納米粒體外釋藥24 h時(shí)，累計(jì)釋放達(dá)到71.85%，表現(xiàn)出TNF