高脂血癥模型小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的:研究高脂血癥對睪丸生精細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制。
　　 方法：將購買的12只載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)基因敲除的C57BL/6J雄性小鼠隨機(jī)分成兩組：一組給予高脂飼料，制備高脂血癥模型（高脂血癥組）；另一組喂飼高脂飼料，并褪黑素(melatonin，MT）1mg/(kg·d)灌胃（MT組）；以6只ApoE基因野生型C57BL/6J雄性小鼠，給予普通飲食，作為對照組。喂飼12w后摘除眼球取血，測量三

2、組血脂水平，取睪丸組織進(jìn)行以下研究：①石蠟切片HE染色；②超薄切片透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)變化；③脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記（Teminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）法檢測睪丸組織凋亡細(xì)胞；④睪丸組織Bcl-2和Bax免疫組織化學(xué)染色并進(jìn)行計(jì)算機(jī)圖像分析。
　　 結(jié)果：①高脂血癥組血清CHO（35.0883±1

3、.3348）和LDL-c（14.0867±6.5688）均明顯高于對照組,對照組分別為2.3867±0.1509和0.5417±0.0343，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，高脂血癥模型構(gòu)建成功；與高脂血癥組相比，MT組血清LDL-c（5.2167±1.3786）明顯降低(P<0.05)，CHO則無明顯變化(P>0.05)。②HE染色顯示，高脂血癥組小鼠睪丸生精小管基膜不完整，厚薄不一，生精細(xì)胞層數(shù)明顯減少，間隙增大，細(xì)胞排列混亂

4、；MT組睪丸結(jié)構(gòu)基本正常。③高脂血癥組小鼠睪丸超微結(jié)構(gòu)變化主要表現(xiàn)為：生精細(xì)胞線粒體腫脹空泡變性，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，核糖體脫顆粒，胞內(nèi)出現(xiàn)電子密度較高的異常結(jié)構(gòu)；支持細(xì)胞線粒體腫脹空泡化，核膜外側(cè)出現(xiàn)致密沉淀物，胞內(nèi)出現(xiàn)較大空泡；生精小管基膜厚薄不均，成波浪式皺褶。MT組超微結(jié)構(gòu)基本正常。④TUNEL結(jié)果顯示，各組均可觀察到凋亡細(xì)胞。與對照組相比，高脂血癥組生精細(xì)胞凋亡明顯增多(P<0.05)，多發(fā)生在精原細(xì)胞和精母細(xì)胞；MT組凋亡細(xì)胞數(shù)

5、較之高脂血癥組減少(P<0.05)。⑤Bcl-2和Bax在各組睪丸組織中均有表達(dá)。Bcl-2主要表達(dá)于精母細(xì)胞和分化中的精子細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，Bax主要表達(dá)于精原細(xì)胞、精母細(xì)胞、支持細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、圓形精子細(xì)胞的細(xì)胞核中。與對照組相比，高脂血癥組Bcl-2的表達(dá)下調(diào)，Bax的表達(dá)上調(diào)；與高脂血癥組相比，MT組Bcl-2的表達(dá)上調(diào)，Bax的表達(dá)下調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：高脂血癥導(dǎo)致小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡數(shù)量增