棉酚致小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡及Bax、Bcl-2表達(dá)相關(guān)性研究.pdf

1、為了研究探討棉酚對(duì)雄性小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡的影響。本試驗(yàn)選用48只4-5周齡20.21±1.56g健康的雄性昆明小鼠為研究對(duì)象。在室溫條件下常規(guī)飼養(yǎng)1周，適應(yīng)環(huán)境之后隨機(jī)分為4組，每組12只，對(duì)照組（1％羧甲基纖維素鈉0.4 mL），低劑量組(30 mg·kg-1·d-1)、中劑量組(60 mg·kg-1·d-1)、高劑量組(240 mg·kg-1·d-1)，灌服由1％羧甲基纖維素鈉稀釋的棉酚0.4 mL，連續(xù)灌胃給藥20天。第21天處

2、死，取睪丸組織保存，用于各項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)。通過光學(xué)顯微鏡觀察睪丸組織病理學(xué)變化;透射電鏡觀察棉酚對(duì)睪丸生精細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響;原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)法檢測(cè)睪丸組織生精細(xì)胞的凋亡情況;免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Bax和Bcl-2蛋白的分布和表達(dá);RT-PCR法檢測(cè)睪丸組織Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的表達(dá)。研究結(jié)果表明:蘇木精-伊紅(HE)染色觀察到小鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)，對(duì)照組無明顯的病理變化，低、中劑量組病變輕微;高劑量組正常結(jié)構(gòu)遭

3、到嚴(yán)重的破壞，結(jié)構(gòu)松散，生精小管管壁變薄，各級(jí)生精細(xì)胞排列紊亂，生精細(xì)胞大量的成團(tuán)脫落到管腔內(nèi)，甚至沒有成熟的精子。透射電鏡觀察到對(duì)照組各級(jí)生精細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞器結(jié)構(gòu)清晰;低劑量組變化較小;中劑量組和高劑量組生精細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷嚴(yán)重，可以觀察到自噬體，成熟精子頂體膜斷裂。TUNEL檢測(cè)發(fā)現(xiàn)對(duì)照組小鼠睪丸組織中僅有零星散在的凋亡細(xì)胞;凋亡指數(shù)，與對(duì)照組相比，低劑量組升高但不顯著(P＞0.05)，中劑量組與高劑量均都顯著升高(0.01

4、＜P＜0.05，P＜0.01)。Bax蛋白的表達(dá)結(jié)果，低劑量組較對(duì)照組有所升高(P＞0.05);中劑量組表達(dá)明顯升高(0.01＜P＜0.05);高劑量組升高極顯著(P＜0.01);與低劑量組相比，中劑量組與高劑量組Bax蛋白顯著升高(0.01＜P＜0.05，P＜0.01)。低劑量組Bcl-2蛋白表達(dá)較對(duì)照組升高(P＞0.05)，中劑量組和高劑量組Bcl-2蛋白顯著降低(0.01＜P＜0.05，P＜0.01)。與對(duì)照組相比，低劑量組Bcl

5、-2mRNA表達(dá)量明顯升高(0.01＜P＜0.05)，Bax mRNA表達(dá)量增加，但是無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與對(duì)照組和低劑量組相比，中劑量組Bcl-2 mRNA表達(dá)量顯著降低(0.01＜P＜0.05)，Bax mRNA表達(dá)量顯著升高(0.01＜P＜0.05);高劑量組較對(duì)照組和低劑量組Bcl-2 mRNA表達(dá)量都極顯著降低(P＜0.01)，Bax mRNA表達(dá)量都升高極顯著(P＜0.01)。高劑量組Bcl-2 mRNA表達(dá)較中劑量組明顯降低(0