鼻息肉中iNOS、Bax及Bcl-2的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　 鼻息肉是鼻科常見病,具有易復(fù)發(fā)的特點(diǎn),在鼻科疾病中占有重要的地位,鼻息肉致病因素多,發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,是多因素綜合作用下所形成的鼻腔黏膜慢性持續(xù)性炎癥過程。一氧化氮(NO)是一種內(nèi)源性的活性氣體遞質(zhì),它屬于神經(jīng)遞質(zhì)類的富于反應(yīng)性的極小氣體分子,NO結(jié)構(gòu)簡單、難溶于水、具有自由基的性質(zhì),NO在血管緊張性調(diào)節(jié)、宿主免疫、炎癥和神經(jīng)信息傳遞中起著重要的作用,NO是由一氧化氮合酶(NOS)催化左旋精氨酸而生成的,NOS在目前被

2、分為3種亞型:Ⅰ型為神經(jīng)元型(nNOS或,NOSl);Ⅱ型為誘導(dǎo)型(iNOS或NOS2);Ⅲ型為內(nèi)皮型(eNOS或NOS3)。Ⅰ型和珊型是結(jié)構(gòu)型(cNOS),它催化生成的NO量很少、釋放迅速、持續(xù)時間較短,它主要在生理情況下起作用;Ⅱ型NOS催化生成的NO量大、持續(xù)時間較長,主要在病理情況下起作用。Bcl-2基因家庭是細(xì)胞凋亡的重要調(diào)控基因,Bcl-2和Bax是一對最為熟知的抑凋亡與凋亡基因。目前,iNOS、Bcl-2和Bax在鼻息肉中

3、的表達(dá)均有報道,但表達(dá)結(jié)果差異較大,而且三者在鼻息肉中表達(dá)的相關(guān)性未見報道。本研究旨在檢測iNOS,Bax,Bcl-2的表達(dá)及相關(guān)關(guān)系,探討iNOSX寸凋亡的影響及三者在鼻息肉發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　 方法:
　　 取自臨床30例鼻息肉手術(shù)患者的部分息肉組織,每例標(biāo)本取大小相近(約1cm*1cm*1cm)的4塊組織,分別用于形態(tài)學(xué)觀察和三種實(shí)驗(yàn)方法,其中用于免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)的組織塊足夠大以備切片充分,每塊組織用錫紙包裝做

4、好標(biāo)記速凍待檢,應(yīng)用原位末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測鼻息肉組織凋亡情況,定性分析;免疫組織化學(xué)SABC法檢測iNOS及Bax,Bcl-2的表達(dá),定性分析;WesternBlot方法進(jìn)一步檢測iNOS,Bax,Bcl-2三種蛋白的表達(dá)水平,半定量分析,統(tǒng)計分析探討三種蛋白的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:
　　 1、TUNEL方法檢測凋亡基因位于鼻息肉表層上皮細(xì)胞及腺體上皮細(xì)胞,30例組織均有表達(dá),但表達(dá)強(qiáng)弱不一。
　　 2

5、、免疫組化檢測30例組織iNOS及Bax,Bcl-2均表達(dá)于鼻息肉組織上皮細(xì)胞,腺上皮細(xì)胞,血管內(nèi)皮細(xì)胞和浸潤的炎性細(xì)胞,陽性定位于細(xì)胞質(zhì),其中Bax表達(dá)為弱陽性,iNOS、Bcl-2表達(dá)為強(qiáng)陽性。
　　 3、WesternBlot檢測三種蛋白均有表達(dá),且iNOS和Bcl-2兩種蛋白表達(dá)水平高,Bax表達(dá)水平低,圖像分析軟件處理其相對灰度值,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理,三種抗體表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01),iNOS與Bcl-2的表達(dá)具