農(nóng)桿菌介導(dǎo)犁苞濱藜NHX基因轉(zhuǎn)化苜蓿影響因素的研究.pdf

1、本試驗以子葉為外植體研究了2個苜蓿品種(新牧1號雜花苜蓿、新疆大葉紫花苜蓿)的組織培養(yǎng)程序，建立了苜蓿子葉植株再生體系。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將耐鹽基因犁苞濱藜NHX轉(zhuǎn)入苜蓿中，初步優(yōu)化了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的方法。研究結(jié)果如下： (1)苜蓿子葉高效再生體系的建立①誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+2，4-D 2mg/L+KT 0.5mg/L，新牧1號雜花苜蓿的出愈率為98.3﹪，新疆大葉紫花苜蓿的出愈率為97.5﹪；②分化培養(yǎng)基：MS+6-BA 0.5mg

2、/L+NAA 0.1mg/L;新牧1號雜花苜蓿的綠芽分化率為38.4﹪，成苗率為19.3﹪；新疆大葉紫花苜蓿的綠芽分化率為43.3﹪，成苗率為22.5﹪；③生根培養(yǎng)基：1/2MS，新牧1號雜花苜蓿的生根率為45.7﹪，移栽成活率為78.3﹪，新疆大葉紫花苜蓿的生根率為62.6﹪，移栽成活率為74.2﹪。 (2)農(nóng)桿菌介導(dǎo)犁苞濱藜NHX的苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化體系在愈傷組織誘導(dǎo)階段加入卡那霉素對愈傷組織的再生有抑制作用，延遲15天進(jìn)行抗性愈

3、傷組織的篩選，可提高轉(zhuǎn)化效率。本文以浸染后外植體的抗性愈傷組織率和抗性體胚形成率為指標(biāo)建立了轉(zhuǎn)化體系：子葉為轉(zhuǎn)化受體的菌液濃度為OD<,600>=0.4～0.5，浸染時間為10～15min，預(yù)培養(yǎng)3d，共培養(yǎng)4d，AS濃度為20～30mg/L；使用200mg/L的羧芐青霉素脫菌，在Kan 50mg/L下篩選得到具有卡那抗性的子葉愈傷組織系，在Kan 10mg/L下篩選出抗性芽；對所獲得的抗性芽進(jìn)行PCR檢測，結(jié)果表明犁苞濱藜NHX基因整