microRNA-29b在血管緊張素Ⅱ誘導腎臟纖維化中的作用.pdf

1、目的:觀察自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)和Wistar-Kyoto(WKY)大鼠腎臟皮質組織microRNA-29b(miR-29b)表達是否存在差異，探討miR-29b在血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)誘導腎臟纖維化中的作用。
　　 方法:實時定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction

2、，RT-qPCR)檢測SHR大鼠和WKY大鼠腎臟皮質組織miR-29b表達的差異。
　　 體外培養(yǎng)大鼠腎小管上皮細胞株(NRK-52E細胞)和大鼠腎間質成纖維細胞(NRK-49F細胞)，給予AngⅡ10-7mol/L（為AngⅡ組），以正常培養(yǎng)的細胞做空白對照，RT-qPCR檢測AngⅡ組和正常對照組細胞miR-29b表達差異，運用Western Bolt技術和RT-qPCR技術分別檢測AngⅡ組和空白對照組NRK-52E細胞內

3、轉化生長因子β(TGF-β)，α肌動蛋白(α-SMA)，Ⅰ型膠原蛋白(ColⅠ)以及NRK-49F細胞內TGF-β，ColⅠ，金屬基質蛋白酶-2(MMP-2)的表達差異，運用ELISA檢測NRK-49F細胞MMP-2的表達。
　　 NRK-52E細胞和NRK-49F細胞轉染miR-29b inhibitor，建立miR-29b低表達細胞模型，實驗分三組:①空白對照組:正常培養(yǎng)的細胞未經任何處理;②低表達組:轉染miR-29b i

4、nhibitor;③陰性對照組:轉染隨機合成NCmicroRNA片段。
　　 NRK-52E細胞和NRK-49F細胞再轉染miR-29bmimics，建立miR-29b高表達模型，24h后給予AngⅡ10-7mol/L，實驗分三組:①空白對照組:細胞給予AngⅡ誘導;②高表達組:細胞轉染miR-29b mimcs，再給予AngⅡ誘導;③陰性對照組:細胞轉染隨機合成NCmicroRNA片段，再給予AngⅡ誘導。
　　 用流

5、式細胞儀技術檢測轉染率，用RT-qPCR檢測轉染效果，運用Western Bolt技術和RT-qPCR技術分別檢測各組中NRK-52E細胞TGF-β，α-SMA、ColⅠ的表達差異以及NRK-49F細胞TGF-β，ColⅠ，MMP-2的表達差異，運用ELISA檢測NRK-49F細胞MMP-2的表達。
　　 結果:
　　 1、相比較WKY大鼠，SHR大鼠腎臟皮質組織miR-29b表達下降（P＜0.05）。
　　 2

6、、無論是NRK-52E細胞還是NRK-49F細胞，相對空白對照組，AngⅡ組miR-29b明顯下降（P＜0.05），TGF-β、α-SMA、COLⅠ的mRNA表達和蛋白表達明顯升高（P＜0.05）。
　　 3、流式細胞儀技術檢測NRK-52E細胞和和NRK-49F細胞轉染率分別為95.14％和94.24％。
　　 4、相比空白對照組，低表達組miR-29b（0.07±0.02）表達明顯下降(P＜0.05)，低表達組的NR

7、K-52E細胞α-SMA、TGF-β、COLⅠ的表達比空白對照組和陰性對照組均上調（P＜0.05），而空白對照組和陰性對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。低表達組的NRK-49F細胞TGF-β、COLⅠ和MMP-2的表達比空白對照組和陰性對照組均上調（P＜0.05），而空白對照組和陰性對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)5、相比空白對照組，高表達組miR-29b表達明顯升高（P＜0.05）。高表達組的NRK-52E細胞α-SM

8、A，TGF-β，COLⅠ的mRNA表達和蛋白表達比空白對照組和陰性對照組均下調（P＜0.05），而空白對照組和陰性對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。高表達組的NRK-49F細胞TGF-β，COLⅠ和MMP-2的表達比空白對照組和陰性對照組均下調(P＜0.05)，而空白對照組和陰性對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)
　　 結論:SHR大鼠腎臟皮質組織miR-29b的表達水平比WKY大鼠下降，這可能和SHR大鼠體內的高