大鼠脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞四種酶的超微定位研究.pdf

1、目的：位于腦室的脈絡(luò)叢可以看作是由緊密連接上皮包繞的血管叢，進(jìn)而形成了血液和腦脊液間的界面。腦脊液分泌是脈絡(luò)叢上皮的主要特點(diǎn)，是由許多無機(jī)離子跨過脈絡(luò)叢上皮交換的結(jié)果，其主要驅(qū)動(dòng)力來自上皮細(xì)胞腦脊液面的鈉鉀泵和碳酸酐酶。本研究將應(yīng)用4種與細(xì)胞功能密切相關(guān)的酶(三磷酸腺苷酶-提供能量；酸性磷酸酶-溶酶體的標(biāo)志酶；)的電鏡細(xì)胞化學(xué)超微定位技術(shù)對(duì)脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞進(jìn)行研究，以期進(jìn)一步全面了解脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞內(nèi)的酶定位，并探討其在腦脊液生成、吸收和循

2、環(huán)中的意義，為人類進(jìn)一步認(rèn)識(shí)腦的解剖和生理提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。同時(shí)，對(duì)于深入研究腦積水、腦膜炎，神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病等疾病的發(fā)病機(jī)理，具有廣闊的應(yīng)用前景。 方法：選取正常成年雄性SD大鼠80只，體重200-350g，常規(guī)飼養(yǎng)，自然光照，隨機(jī)分為4個(gè)組每組20只，用于四種酶的電鏡酶組織化學(xué)觀察。水合氯醛腹腔麻醉后，迅速切取側(cè)腦室、三腦室、四腦室脈絡(luò)叢。采用檸檬酸鉛法做AKPase酶，硝酸鉛法做ACPase，Uusitalo-Karnovs

3、ky法做5'-NTase，Wachstein-Meisel法做Mg<'2+>-ATPase的組織化學(xué)染色。取材后放入相應(yīng)固定液中短時(shí)固定后，放入同種的緩沖液中4℃下過夜，在37℃溫箱中孵育，用冷的緩沖液充分洗滌后，再用冷1％四氧化餓后固定1小時(shí)，梯度丙酮脫水，包埋劑浸透、包埋和聚合，超薄切片，醋酸雙氧鈾輕染，JEM-1230透射電鏡觀察照相。酶細(xì)胞化學(xué)對(duì)照實(shí)驗(yàn)：(1)作用液不加專一性物；(2)作用前用60℃處理30 min；(3)加特異

4、性抑制劑(AKPase用左旋咪唑抑制)。 結(jié)果：(1)形態(tài)學(xué)觀察：透射電鏡下脈絡(luò)叢的結(jié)構(gòu)有三種成分，以毛細(xì)血管網(wǎng)為中心，周圍為結(jié)締組織，表面為脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞．上皮細(xì)胞呈單層立方形，核位于細(xì)胞基底部，呈圓形或橢圓形，胞質(zhì)內(nèi)線粒體和小泡狀滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較多，高爾基氏體豐富，它們分布于細(xì)胞頂部，游離核糖體豐富，多分散于胞質(zhì)內(nèi)，細(xì)胞的游離面有密集的微絨毛，上皮細(xì)胞基底部質(zhì)膜有折疊形成許多質(zhì)膜內(nèi)褶，胞外有基膜。細(xì)胞間有特殊連接構(gòu)成復(fù)合體，毛

5、細(xì)血管為有孔型，基質(zhì)結(jié)締組織由伸長的成纖維細(xì)胞分泌的膠原纖維網(wǎng)組成。偶見叢上細(xì)胞，這些細(xì)胞與脈絡(luò)叢上皮緊密相關(guān)，形態(tài)多樣。他們位于上皮細(xì)胞頂部微絨毛，顯示出典型激活巨噬細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)如小泡和溶酶體。(2)脈絡(luò)叢上皮酸性磷酸酶(ACPase)的超微分布：當(dāng)用2％多聚甲醛和2％戊二醛混合固定時(shí)，透射電鏡下可見ACPase活性出現(xiàn)在上皮細(xì)胞的溶酶體；當(dāng)用2％多聚甲醛和0.5％戊二醛混合固定時(shí)，ACPase活性不僅出現(xiàn)在上皮細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，

6、還出現(xiàn)在靠近高爾基體成熟面的滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上。對(duì)照組的溶酶體、高爾基體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器均未顯示ACPase活性。各腦室脈絡(luò)叢上皮酸性磷酸酶的分布未見明顯差異。各腦室脈絡(luò)叢上皮酸性磷酸酶的分布未見明顯差異。(3)脈絡(luò)叢上皮堿性磷酸酶(AKPase)的超微分布：AKPase活性出現(xiàn)在各腦室脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞的微絨毛和基底褶的質(zhì)膜上，上皮連接處、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、血液、紅細(xì)胞膜和間質(zhì)纖維細(xì)胞上。AKPase活性還出現(xiàn)在胞質(zhì)，高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、

7、溶酶體等細(xì)胞器的質(zhì)膜上。三種對(duì)照標(biāo)本均未見陽性反應(yīng)。各腦室間未見明顯差異。(4)鎂三磷酸腺苷酶(Mg<'2+>-ATPase)在脈絡(luò)叢上皮的超微分布：透射電鏡下可見Mg<'2+>-ATPase活性出現(xiàn)在脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞的微絨毛表面、基底皺褶處、細(xì)胞連接處；酶活性還出現(xiàn)在脈絡(luò)叢的間質(zhì)和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞上。對(duì)照實(shí)驗(yàn)未見酶反應(yīng)產(chǎn)物的沉積。各腦室間未見明顯差異。(5)5'-核苷酸酶(5'-NT ase)在脈絡(luò)叢上皮的超微分布：透射電鏡下可見5'-

8、NTase活性出現(xiàn)在上皮細(xì)胞的細(xì)胞連接和基底皺褶處，在上皮細(xì)胞微絨毛、間質(zhì)內(nèi)未見反應(yīng)產(chǎn)物的沉積。上皮細(xì)胞內(nèi)各種細(xì)胞器的質(zhì)膜亦未見反應(yīng)產(chǎn)物沉積。各腦室間未見明顯差異。 結(jié)論：ACPase通過對(duì)腦脊液中物質(zhì)的攝取和細(xì)胞代謝產(chǎn)物的儲(chǔ)存，在參與腦脊液中物質(zhì)的清除和維護(hù)大腦內(nèi)環(huán)境的平衡中起著重要作用。我們推測(cè)脈絡(luò)叢上皮上AKPase的作用是阻止磷酸酯類入腦和/或參與轉(zhuǎn)磷酸過程，進(jìn)而參與某些物質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，并可能構(gòu)成酶屏障。脈絡(luò)叢上皮緣的A