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1、目的: 使用血栓/溶栓方法建立耳蝸缺血/再灌注動(dòng)物模型,為臨床內(nèi)耳微循環(huán)障礙疾病的研究提供較為理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型;在該模型基礎(chǔ)上,觀察缺血/再灌注對(duì)聽覺器官形態(tài)及其功能的影響;觀察ANP的應(yīng)用對(duì)耳蝸功能的影響,掌握ANP應(yīng)用的時(shí)機(jī),了解心鈉素對(duì)缺血再灌注耳蝸損傷的改善作用,為建立有效的治療奠定基礎(chǔ)。 方法: 1.隨機(jī)將豚鼠分為5組:正常組、手術(shù)組、血栓組、溶栓組、對(duì)照組。手術(shù)經(jīng)顱底暴露小腦前下動(dòng)脈(AICA),使
2、用FeCl3溶液誘導(dǎo)AICA形成血栓,建立缺血模型;頸外靜脈注射尿激酶(UK)以溶解血栓,建立再灌注模型。對(duì)照組在血栓誘導(dǎo)形成后,給予等量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)過程中監(jiān)測(cè)耳蝸血流(CoBF)、實(shí)驗(yàn)前后測(cè)量聽性腦干反應(yīng)(ABR)值,血栓組及溶栓組AICA病理切片HE染色觀察血栓形態(tài)。 2.隨機(jī)將豚鼠分為5組:正常組、缺血30min組、缺血30min再灌注組、缺血60min組、缺血60min再灌注組。模型制作方法同前,實(shí)驗(yàn)過程中監(jiān)測(cè)耳蝸血流
3、(CoBF),實(shí)驗(yàn)前后測(cè)量豚鼠聽性腦干反應(yīng)(ABR)值、畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射(DPOAE)值,實(shí)驗(yàn)后耳蝸基底膜鋪片硝酸銀染色,光鏡觀察。 3.隨機(jī)將豚鼠分為4組:實(shí)驗(yàn)組(A1、B1)及對(duì)照組(A2、B2)。模型制作方法同前。實(shí)驗(yàn)組A1在建模前10min靜脈注射心鈉素,實(shí)驗(yàn)組B1在再灌注即刻靜脈注射心鈉素,對(duì)照組(A2、B2)在相應(yīng)時(shí)間靜脈注射等量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)過程中監(jiān)測(cè)CoBF,并測(cè)定ABR值。 結(jié)果: 1.血栓組、
4、溶栓組和對(duì)照組實(shí)驗(yàn)后ABRⅢ波反應(yīng)閾均比實(shí)驗(yàn)前有明顯提高,正常組和手術(shù)組實(shí)驗(yàn)前后無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)變化。血栓組、溶栓組及對(duì)照組在FeCl3誘導(dǎo)后,CoBF值下降至誘導(dǎo)前約30%,溶栓組在用UK后,CoBF值恢復(fù)到誘導(dǎo)前約70%。AICA切片HE染色,可見血栓組AICA有明顯白色血栓形成,成分為纖維素、血小板及紅細(xì)胞;溶栓組可見血栓模糊不清,形態(tài)較血栓組稀薄。 2.缺血時(shí)間越長(zhǎng),ABR閾值越高,各頻率DPOAE幅值下降越明顯,毛細(xì)胞破壞
5、越嚴(yán)重。缺血時(shí)間相等時(shí),再灌注組ABR閾值高,DPOAE幅值下降明顯,毛細(xì)胞破壞嚴(yán)重。外毛細(xì)胞較內(nèi)毛細(xì)胞更易受影響。 3.缺血前實(shí)驗(yàn)組A1的CoBF較對(duì)照組A2高,再灌注后至實(shí)驗(yàn)結(jié)束,兩組CoBF值未見明顯差別。實(shí)驗(yàn)組B1和對(duì)照組B2用藥前的CoBF無(wú)明顯差別,再灌注后對(duì)照組B2恢復(fù)到實(shí)驗(yàn)開始時(shí)的70%左右,而實(shí)驗(yàn)組B1恢復(fù)到實(shí)驗(yàn)開始時(shí)相同水平。缺血前4組聽閾無(wú)差別。缺血30min時(shí),實(shí)驗(yàn)組A1的聽閾較對(duì)照組A2低,實(shí)驗(yàn)組B1和
6、對(duì)照組B2聽閾無(wú)差別。再灌注30min和60min時(shí),實(shí)驗(yàn)組A1與對(duì)照組A2無(wú)明顯差別,實(shí)驗(yàn)組B1比對(duì)照組B2顯著降低。 結(jié)論: 1.應(yīng)用FeCl3誘導(dǎo)AICA血栓形成并用UK溶解的方法,可以制備內(nèi)耳缺血/再灌注模型,為臨床內(nèi)耳微循環(huán)障礙疾病的研究提供較理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。 2.血栓/溶栓方法制備的缺血/再灌注模型,從組織學(xué)及電生理學(xué)方面,均引起耳蝸的缺血再灌注損傷:缺血時(shí)間越長(zhǎng),損傷越重;缺血時(shí)間相等時(shí),再灌注
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