燈盞細辛對大鼠肺缺血-再灌注損傷的影響.pdf

1、背景及目的:肺缺血-再灌注損傷(lungischemiareperfusioninjury, LIRI)在體外循環(huán)下心臟手術(shù)、肺移植、肺栓塞及休克等多種臨床情況下均可發(fā)生;尤其是肺移植過程中,嚴重者可以引起急性呼吸窘迫綜合癥、多器官功能障礙。迄今為止,LIRI仍是胸心外科醫(yī)生面臨的嚴峻挑戰(zhàn)。肺移植后缺血-再灌注導致的移植肺損傷有較高的發(fā)病率和致死率,故更好的研究LIRI的發(fā)生機制,尋找更有效的措施以減輕再灌注損傷,對臨床實踐有重要意義。

2、本實驗通過建立大鼠原位肺缺血-再灌注損傷模型,檢測各組肺濕干重比(wet/dry,W/D),肺組織髓質(zhì)過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)活性,以及肺細胞核內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性及含量,光鏡下HE染色觀察病理形態(tài)學改變、電鏡觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)變化,初步探討燈盞細辛(erigeron breviscapine)通過抑制NF-κB活化對抗鼠LIRI損傷的可能機制。
　

3、　材料和方法:健康雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠32只,3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉,麻醉成功后肌肉注射阿托品0.04mg/kg。氣管切開后插管連接小動物呼吸機控制呼吸,呼吸頻率60次/分,吸呼比為1:1.5,工作壓力(即潮氣量)0.02MP。經(jīng)左側(cè)第5肋間進入胸腔,游離左側(cè)肺門,過阻斷帶,套膠管形成活結(jié)備阻斷用。手術(shù)操作前經(jīng)陰莖背靜脈注射肝素鈉100U/kg以維持肝素化。
　　將大鼠隨機分成4組(

4、n=8):①假手術(shù)組(I組,術(shù)前三天每天腹腔注射生理鹽水10ml/kg,單純開胸165min,不阻斷肺門);②缺血-再灌注組(II組,術(shù)前三天每天腹腔注射生理鹽水10ml/kg,肺門阻斷45min后再灌注2h);③小劑量燈盞細辛組(III組,術(shù)前三天每天腹腔注射燈盞細辛25mg/kg,阻斷45min后再灌注2h);④大劑量燈盞細辛組(IV組,術(shù)前三天每天腹腔注射燈盞細辛50mg/kg,阻斷45min后再灌注2h)。
　　上述處理后

5、,經(jīng)頸動脈放血處死大鼠,并取左肺標本,所有標本放置于-70℃保存。觀察各組肺組織濕干重比(W/D),MPO測試盒比色法檢測各組肺組織 MPO活性,應用SP法免疫組化及Western blot法檢測肺細胞核內(nèi)NF-κB活性及含量〔以積分吸光度IA(目的條帶/正常條帶)代表蛋白的表達量〕,光鏡下 HE染色觀察病理形態(tài)學改變、透射電鏡觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)變化。
　　結(jié)果:
　　(1)肺組織 W/D、MPO的變化:經(jīng)缺血-再灌注后,

6、II組肺組織中 W/D以及 MPO的水平較I組(假手術(shù)組)顯著升高(p<0.01);應用燈盞細辛后,III、IV組W/D、MPO含量明顯低于II組(p<0.01)。III、IV組之間比較差異有顯著意義(p<0.01)。
　　(2) NF-κB p65蛋白含量:
　　免疫組化:再灌注后II組見大量細胞胞核強陽性著色,胞漿亦呈陽性著色。III、IV組胞核著色較II組明顯減少,較I組略多。
　　Western blot:II

7、組單純?nèi)毖?再灌注后NF-κB的IA值明顯高于I組(p<0.01);注射燈盞細辛后,III、IV組肺組織細胞核中NF-κB IA值明顯低于II組(p<0.01)。且IV組IA值顯著低于III組(p<0.01)。
　　(3)肺組織病理變化:II組中肺組織損傷進行性加重,毛細血管充血、肺泡間隔炎性細胞浸潤、肺泡腔內(nèi)炎癥細胞及炎性液體滲出顯著。IV組應用燈盞細辛后,肺組織充血、水腫、炎癥細胞浸潤的程度較II組明顯減輕。III組變化介于I

8、I、IV組之間。
　　(4)肺組織超微結(jié)構(gòu)變化:II組血管內(nèi)皮細胞腫脹,內(nèi)皮細胞間隙增大;內(nèi)皮細胞及肺泡上皮細胞的胞質(zhì)空泡化,線粒體腫脹明顯。IV組可見較多正常線粒體,各細胞腫脹顯著減輕。III組可見少許正常線粒體。
　　結(jié)論:(1)燈盞細辛可以減輕大鼠LIRI損傷,且這種作用與劑量有關(guān),大劑量作用比小劑量顯著。(2)燈盞細辛可以抑制NF-κB活化,從而在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控炎癥介質(zhì)分泌,減輕炎癥反應及其引起的損傷。(3)燈盞細辛可