缺血再灌注致結(jié)腸動力動態(tài)損傷動物模型的研究.pdf

1、目的：
　　 胃腸的運動功能是消化系統(tǒng)最主要的生理功能之一。臨床上將脘腹脹滿,惡心,嘔吐,噯氣,腹瀉便秘為主要表現(xiàn)或伴有精神不佳,四肢乏力等癥狀者歸屬中醫(yī)脾胃病范疇。有實驗研究表明,缺血再灌注可以導(dǎo)致大鼠精神萎靡、活動欠佳、毛色晦暗、腹部脹滿并出現(xiàn)胃腸動力障礙,提示缺血再灌注模型在一定程度上模擬了中醫(yī)理論中焦壅塞,氣機淤滯,脾氣下陷,胃氣上逆所致的脾胃升降失常的臨床表現(xiàn)。本實驗分別建立腸系膜上動脈缺血再灌注模型和肢體缺血再灌注動

2、物模型,以不同缺血時間和不同再灌注時間進行分組。通過對大鼠腸黏膜及主要臟器病理形態(tài)觀察；結(jié)腸平滑肌肌條收縮振幅及結(jié)腸平滑肌細胞Ca2+-ATP酶活力的檢測,比較兩種造模方法對結(jié)腸動力損傷的動態(tài)變化規(guī)律,并篩選適合的胃腸動力障礙模型,有助于今后探索臨床不同階段胃腸動力障礙性疾患的最佳給藥時間與合理用藥,提供實驗研究依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、建立腸系膜上動脈缺血再灌注動物模型:利用無創(chuàng)動脈夾夾閉大鼠腸系膜上動脈:統(tǒng)一缺

3、血45min,依據(jù)不同再灌注時間分為:再灌注6h組、再灌注24h組、再灌注48h組(C45-6、C45-24、C45-48)；統(tǒng)一再灌注時間48h,依據(jù)不同缺血時間進行分為:缺血60min組、缺血75min組(C60-48、C75-48)。
　　 2、建立肢體缺血再灌注動物模型:采用統(tǒng)一300g拉力橡皮筋束縛大鼠雙側(cè)大腿腹股溝處,環(huán)繞結(jié)扎3周,持續(xù)缺血3小時后,迅速解除結(jié)扎,進行肢體再灌注,按照再灌注時間不同分為:12h組、18

4、h組、24h組(Z3-12、Z3-18、Z3-24)。
　　 3留取小腸、結(jié)腸及心臟、肺臟、腎臟,進行HE染色,光鏡下觀察其病理變化,計數(shù)小腸絨毛正常分型的比例,測量小腸黏膜厚度及絨毛高度。
　　 4制備大鼠離體結(jié)腸平滑肌肌條,通過對大鼠結(jié)腸平滑肌肌條收縮波平均振幅的檢測,探討不同時間點結(jié)腸平滑肌收縮波振幅動態(tài)變化的規(guī)律。
　　 5制各大鼠結(jié)腸平滑肌細胞,運用定磷法測定細胞內(nèi)ca2+-ATP酶活力,探討不同缺血再

5、灌注模型結(jié)腸平滑肌細胞Ca2+-ATP酶活力的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、腸系膜上動脈缺血再灌注模型組:統(tǒng)一缺血45min組,在延長再灌注時間后小腸黏膜病理出現(xiàn)形態(tài)改變,但正常絨毛分型比例、黏膜厚度絨毛高度與空白對照組均無差異(P>0.05),結(jié)腸平滑肌肌條收縮波振幅于再灌注6h、24h呈下降,再灌注48h后上升的趨勢,與空白對照組均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。統(tǒng)一再灌注48h組,缺血時間由45min延長至60mi

6、n后,小腸黏膜正常絨毛分型比例、絨毛高度、黏膜厚度均較空白對照組呈有意下降(P<0.05),結(jié)腸平滑肌肌條收縮振幅下降(P<0.05)；延長缺血時間至75min結(jié)腸腸壁變薄,肌張力差,不能耐受1g前負荷,無法測量其振幅。模型各組結(jié)腸黏膜部分出現(xiàn)輕度病理改變。缺血75min組結(jié)腸平滑肌細胞Ca2+-ATP酶活力較空白對照組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　 2、肢體缺血再灌注模型各組:小腸粘膜均出現(xiàn)病理形態(tài)的改變,正常絨毛分型比

7、例、絨毛高度、絨毛厚度均較空白對照組呈有意下降(P<0.05)。隨再灌注時間延長各組小腸黏膜病理損傷呈有意下降(P<0.05),各組心臟、肺臟、腎臟均出現(xiàn)不同程度的病理損傷。肢體缺血再灌注12h、18h組結(jié)腸平滑肌肌條收縮波振幅均低于空白對照組(P<0.05,P<0.01)；再灌注24h結(jié)腸平滑肌變薄,彈性差,不能耐受1g前負荷拉力,無法測量其振幅。模型各組結(jié)腸黏膜部分出現(xiàn)了病理改變。肢體缺血再灌注12h組結(jié)腸平滑肌細胞Ca2+-ATP