復(fù)方丹參方治療動(dòng)脈粥樣硬化作用的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、中藥復(fù)方是通過化學(xué)成分組合影響到信號(hào)分子組合,使紊亂的信號(hào)分子網(wǎng)絡(luò)恢復(fù)平衡,從而達(dá)到治療中醫(yī)的證和相關(guān)疾病的作用和效果.課題以蛋白質(zhì)組技術(shù)為依托,以基因芯片、RT-PCR和分子雜交等技術(shù)為補(bǔ)充建立了一套將化學(xué)成分組合與信號(hào)分子組合直接相關(guān)聯(lián)的技術(shù)平臺(tái),考察了復(fù)方丹參方、有效單體和單體組合對(duì)AS細(xì)胞模型和臨床病人血漿的影響,研究目的旨在通過研究初步揭示復(fù)方丹參方是哪幾個(gè)成分通過哪幾條途徑對(duì)AS起治療作用的.實(shí)驗(yàn)建立并完善了蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)平

2、臺(tái),將DIGE技術(shù)與硝酸銀和考馬斯亮藍(lán)染色的技術(shù)相比較發(fā)現(xiàn)三色熒光標(biāo)記的雙向電泳凝膠具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高,重復(fù)性好的特點(diǎn).在三種蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法中,硝酸銀染色適合確定蛋白質(zhì)點(diǎn)的有無,考馬斯亮藍(lán)R-250染色適合目標(biāo)蛋白質(zhì)為高豐度且樣品量大的情況,DIGE技術(shù)適合用于差異蛋白質(zhì)表達(dá)譜的分析.考察人參皂苷Rg1作用于TNFα損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞的基因和蛋白表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)復(fù)方丹參方中的人參皂苷Rg1可通過升高血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)NO的水平,抑制血管內(nèi)

3、皮細(xì)胞內(nèi)黏附分子ICAM1,VCAM1,E-selectin的表達(dá),促進(jìn)纖溶系統(tǒng)中PAI-1的產(chǎn)生,減少生長(zhǎng)因子VEGF、bFGF、EGF、TGF-β 1的產(chǎn)生等環(huán)節(jié)減輕TNFα對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷.復(fù)方丹參方及其單體組合可以抑制血管平滑肌細(xì)胞中G蛋白偶聯(lián)受體、蛋白激酶C、鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶,進(jìn)而減少基質(zhì)金屬蛋白酶MMP9的表達(dá),同時(shí)通過減少氧化、炎癥、基質(zhì)降解相關(guān)蛋白的產(chǎn)生和促進(jìn)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白p53,p21的表達(dá)來減輕TNFα

4、對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的損傷.血漿蛋白質(zhì)組學(xué)的研究結(jié)果表明復(fù)方丹參方可以降低AS病人血漿中的纖維蛋白原和粒酶.以丹參酮ⅡA和人參皂苷Rg1單體來組方研究發(fā)現(xiàn)單體組方與復(fù)方丹參方在蛋白質(zhì)表達(dá)圖譜、差異基因的變化和體外凝血系統(tǒng)的影響方面具有相似性,而丹參酮ⅡA、人參皂苷Rg1與復(fù)方丹參方的蛋白質(zhì)表達(dá)圖譜差異較大,用單體來組方的研究結(jié)果更接近復(fù)方在一定條件下的作用結(jié)果.AS發(fā)生發(fā)展的機(jī)制為血管內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)、大量平滑肌細(xì)胞增殖與遷移、纖溶減弱、炎