番茄紅素抗家兔動脈粥樣硬化效果及血漿低密度脂蛋白蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、背景：動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是由于血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞受各種危險因子如病毒、機(jī)械損傷、免疫復(fù)合物，特別是氧化型低密度脂蛋白(oxidative low density lipoprotein，ox-LDL)的損傷，而使血管局部產(chǎn)生的一種過度的慢性炎性增生反應(yīng)。鑒于低密度脂蛋白(low density lipoproteins，LDL)的氧化在AS發(fā)展中的作用，應(yīng)用適當(dāng)?shù)目寡趸瘎┮种破溲趸瘧?yīng)可控制或延緩疾

2、病的發(fā)展。最近心臟保護(hù)研究發(fā)現(xiàn)，不論低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoproteins-cholesterol，LDL-C)濃度如何，使用他汀類藥物降低LDL-C濃度可使所有類型的高危病人獲益。氟伐他汀鈉(fluvastatin)具有抗氧化和抑制LDL修飾的作用，為人們公認(rèn)的治療動脈粥樣硬化的藥物；而應(yīng)用他汀類藥物必須考慮到成本和不良反應(yīng)的風(fēng)險。因此，從食物中尋找具有抗氧化作用的物質(zhì)或成分預(yù)防AS，具有極其重要意義。流

3、行病學(xué)研究顯示番茄紅素(lycopene)具有減少或預(yù)防心血管疾病發(fā)生的作用，實驗研究顯示番茄紅素具有淬滅單線態(tài)氧、清除自由基、阻斷脂質(zhì)過氧化、抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞分化、增強(qiáng)免疫力、誘導(dǎo)細(xì)胞間隙連接通訊等多種重要生物活性。脂蛋白與動脈粥樣硬化之間的關(guān)系的分子機(jī)制還不清楚，掌握脂蛋白的蛋白組成可能有助于揭開脂蛋白與動脈粥樣硬化形成的作用及導(dǎo)致人類冠心病的發(fā)病機(jī)制。目前番茄紅素防病效果的實驗室證據(jù)較少，特別是采用番茄紅素含量較高的受試物的

4、體內(nèi)研究尚未見報道。 目的：研究番茄紅素對動脈粥樣硬化形成的保護(hù)作用及血漿LDL蛋白質(zhì)組學(xué)。 方法：(1)采用含量為90％的番茄紅素和氟伐他汀鈉作為受試物，將40只健康成年雄性家兔，根據(jù)總膽固醇(TC)水平隨機(jī)分為正常對照組，普通飼料喂養(yǎng)；模型組，高脂飼料喂養(yǎng)；番茄紅素低、高劑量組[高脂飼料+番茄紅素4mg/(kg bw·d)；高脂飼料+番茄紅素12mg/(kg bw·d)]和陽性藥物對照[高脂飼料+氟伐他汀鈉10mg/

5、kg bw·d)]五組。光學(xué)顯微鏡檢測HE染色的主動脈壁病理改變，檢測家兔血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、T-AOC、MDA、NO及IL-1含量，血漿番茄紅素、ox-LDL含量。(2)應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，探討番茄紅素對高脂誘導(dǎo)家兔血漿LDL蛋白質(zhì)的影響。 結(jié)果： 1.各實驗組與對正常對照組比較，高脂飼料導(dǎo)致家兔TC、TG、LDL-C、MDA、ox-LDL、IL-1水平升高，T-AOC、NO水平降低(P<0.05)

6、；番茄紅素、氟伐他汀組與模型組比較，番茄紅素介入能降低或減小上述參數(shù)的變化(P<0.05)，且作用優(yōu)于氟伐他汀鈉。形態(tài)學(xué)分析顯示，番茄紅素、氟伐他汀鈉顯著減少主動脈壁斑塊形成及病理形態(tài)變化。 2.超離心技術(shù)提取家兔血漿LDL后，測定番茄紅素組血漿LDL蛋白含量為0.56μg/μl，氟伐他汀鈉組血漿LDL蛋白含量為0.34μg/μl；采用SDS-PAGE分離及ESI-MS/MS串聯(lián)質(zhì)譜鑒定方法，60μg樣品36條膠帶中共鑒定了12

7、2個蛋白質(zhì)；番茄紅素組58個蛋白質(zhì)，其中25個為ApoB，氟伐他汀鈉組64個蛋白質(zhì)，其中17個為ApoB。 結(jié)論：1.番茄紅素可抑制高脂誘導(dǎo)家兔血清TC、TG、LDL-C及血漿ox-LDL升高水平，對HDL-C無明顯作用。番茄紅素對高脂飼料誘導(dǎo)的家兔AS形成具有顯著的抑制作用，其中12mg/(kg bw·d)劑量組家兔主動脈病理形態(tài)學(xué)改變與氟伐他汀鈉相似，接近正常水平。 2.番茄紅素在高脂誘導(dǎo)的家兔體內(nèi)通過抑制HMGCo

8、A還原酶而控制膽固醇的合成速度；通過抗氧化作用而減少ox-LDL的形成及脂質(zhì)過氧化；通過抗炎作用，保護(hù)和修復(fù)血管EC及抑制VSMC的增殖。 3.番茄紅素組血漿LDL蛋白含量為0.56μg/μl，氟伐他汀鈉組血漿LDL蛋白含量為0.34μg/μl;60μg樣品36條膠帶中共鑒定了122個蛋白質(zhì)；番茄紅素組58個蛋白質(zhì)，其中25個為ApoB，氟伐他汀鈉組64個蛋白質(zhì)，其中17個ApoB。番茄紅素可能通過調(diào)節(jié)低密度脂蛋白受體減少體內(nèi)膽

9、固醇的合成。 4.番茄紅素組血漿LDL相關(guān)蛋白除載脂蛋白Apo B外，還有ApoE，ApoD，ApoA-I，Cell-surface antigen 4F2，ADP/ATP carrer protein(2，T1)，Solute carrier family 7，Unnaned protein,Serum albumin，β-lactoglobulin，Calcium binding protein A16，Myoglobin，

10、Lysozyme，Chymotrypsin等13種蛋白。氟伐他汀組LDL相關(guān)蛋白質(zhì)除載脂蛋白ApoB外，還有ApoE，ApoD，ApoA-I，ApoC-I，Cell-surface antigen 4F2，Leucocyte antigen，HLA(B5301，B)，Unnaned protein，ADP/ATP carrier protein(Ⅰ，T1)，ATPase，Solute carrier family I，Ubiquinol