空間誘變?nèi)樗峋鳛槲⑸鷳B(tài)制劑菌株的初步研究.pdf

1、空間誘變是一種新型的誘變方式,通過(guò)對(duì)嗜酸乳酸桿菌進(jìn)行空間誘變育種,得到一株試驗(yàn)菌株。本課題通過(guò)對(duì)此菌株的生理生化鑒定及對(duì)小鼠免疫學(xué),腸道菌群功能改善的研究,得知它具有調(diào)節(jié)機(jī)體腸道微生態(tài)平衡的作用,在調(diào)節(jié)功效上與市售成熟產(chǎn)品合生元無(wú)明顯差異。
　　 本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)原有的培養(yǎng)基就誘變后菌株的生長(zhǎng)情況應(yīng)用旋轉(zhuǎn)正交方法作了模擬尋優(yōu)的調(diào)整。其次,對(duì)菌株的生理生化檢驗(yàn)采用常規(guī)微生物檢驗(yàn)方法,考察了誘變后乳酸菌的生長(zhǎng)曲線、耐酸堿性、碳源利用、運(yùn)

2、動(dòng)性測(cè)定、半乳糖苷酶、氨基酸脫羧試驗(yàn)、丙二酸鈉對(duì)照試驗(yàn)等試驗(yàn)反映了誘變后乳酸菌的生理生化特性。最后以腸道菌群檢測(cè)與免疫學(xué)巨噬細(xì)胞吞噬功能測(cè)定、溶血空斑試驗(yàn)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、NK(自然殺傷)細(xì)胞活性測(cè)定及細(xì)胞因子測(cè)定等方法,初步研究了空間誘變?nèi)樗峋鷮?duì)小鼠腸道菌群及免疫功能的影響。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中選擇昆明種小鼠,隨機(jī)分為5組,每組10只,即對(duì)照組、混合菌株組、誘變菌株組、合生元組,誘變前菌株組進(jìn)行20天灌胃飼養(yǎng)。并進(jìn)一步對(duì)模型小鼠的腸道菌群進(jìn)

3、行分析。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)論如下:
　　 1)旋轉(zhuǎn)正交實(shí)驗(yàn)?zāi)M尋優(yōu)得到改良的培養(yǎng)基配方為:葡萄糖24.20g,蛋白胨12.36g,牛肉膏16.36g,酵母膏5g,吐溫-801mL,K2HPO42g,乙酸鈉5g,檸檬酸氫二銨2g,MgS04·7H2O0.2g,MnSO4·4H2O0.05g,加蒸餾水至1000mL。
　　 2)誘變后乳酸菌經(jīng)染色觀察在形態(tài)上沒(méi)有發(fā)生改變,菌體大小與原菌株相近。KJ菌株同MIA一樣有運(yùn)動(dòng)性

4、；KJ菌株在O-硝基苯-β-D吡喃半乳糖苷酶試驗(yàn)中觀察反應(yīng)為陽(yáng)性；氨基酸脫羧敏試驗(yàn)兩種菌株相同；碳源利用試驗(yàn)中KJ菌株在乳糖利用試驗(yàn)中呈陽(yáng)性；在耐鹽性方面誘變后菌株KJ呈負(fù)突變。
　　 3)誘變前后兩株菌生長(zhǎng)曲線可以看到,誘變后菌株比原菌株提前2h進(jìn)入對(duì)數(shù)期,在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌株生長(zhǎng)速度大于誘變前菌株；誘變后乳酸菌耐酸性方面呈正突變。
　　 4)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中,誘變后菌株實(shí)驗(yàn)組小鼠免疫器官胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)相對(duì)于原菌株有顯著提

5、高P<0.05;小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)中誘變后菌株也有顯著提高P<0.05;誘變組小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力也顯著提高P<0.05；NK細(xì)胞活性也有顯著提高P<0.05。
　　 5)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素4和干擾素γ測(cè)定使用ELISA雙抗體夾心法試劑盒測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線,并用實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血清作樣本測(cè)定細(xì)胞因子含量,誘變后菌株組相比較原菌株都有顯著提高。
　　 6)腸道菌群分析試驗(yàn)中,誘變菌組小鼠糞便中雙歧桿菌和乳桿菌明顯增加,產(chǎn)氣莢膜梭