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1、目的:白眉蝮蛇去整合素Adinbitor在畢赤酵母中的表達(dá)及對(duì)其生物學(xué)活性的初步研究。 方法:實(shí)驗(yàn)中首先設(shè)計(jì)帶有限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ與NotⅠ位點(diǎn)的引物,采用PCR的方法得到AdinbitorcDNA。將AdinbitorcDNA進(jìn)行克隆、轉(zhuǎn)化與誘導(dǎo)后,得到了該蛋白的分泌性高效表達(dá);經(jīng)凝膠過濾層析純化。利用兔富含血小板血漿的測(cè)試系統(tǒng)和雞胚絨毛尿囊膜(chickchorioallantoicmembrane,CAM)模型進(jìn)行血小
2、板聚集實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)血管新生抑制實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果:成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pPIC9K-Adinbitor并在畢赤酵母GS115中表達(dá)了去整合素rAdinbitor。rAdinbitor可呈劑量依賴性抑制ADP誘導(dǎo)的兔血小板聚集。關(guān)于血管新生的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,rAdinbitor可顯著抑制雞胚絨毛尿囊膜(CAM)的血管生成,表明rAdinbitor為血管新生的有效抑制劑。 結(jié)論:本論文通過基因工程的方法成功的構(gòu)建了真核表達(dá)載體pPIC9K
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