LeARG2基因和LeTD2基因的抗蟲性驗(yàn)證及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆未成熟子葉遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、大豆遺傳轉(zhuǎn)化是防治大豆蟲害、培育抗蟲大豆新品種、提高大豆產(chǎn)量的快速有效的手段。而篩選有效的抗蟲基因和建立穩(wěn)定的大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系是培育抗蟲轉(zhuǎn)基因大豆的重要前提。由于大豆遺傳轉(zhuǎn)化的周期比較長(zhǎng)，我們將目的基因轉(zhuǎn)入模式植物擬南芥中進(jìn)行抗蟲實(shí)驗(yàn)，以檢測(cè)目的基因的抗蟲效果。
　　番茄精氨酸酶基因LeARG2和蘇氨酸脫氨酶基因Le TD2被研究發(fā)現(xiàn)參與了番茄的昆蟲防御機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)室前期已獲得了Col-0背景的LeARG2和LeTD2轉(zhuǎn)基因擬南芥

2、的7個(gè)純合株系，對(duì)這7個(gè)轉(zhuǎn)基因擬南芥株系進(jìn)行了抗蟲性檢測(cè)和精氨酸酶活力分析，結(jié)果顯示LeARG2基因具有顯著的抗蟲性，而LeTD2基因沒有明顯的抗蟲性。
　　本研究以體細(xì)胞胚發(fā)生能力較高的Jack和Williams82的未成熟子葉為外植體，用農(nóng)桿菌EHA105進(jìn)行大豆遺傳轉(zhuǎn)化。確定了Jack和Williams82的Basra篩選濃度分別為2.0 mg/L和1.0 mg/L。研究了抗生素和抗氧化劑對(duì)體細(xì)胞胚誘導(dǎo)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn):使用

3、300 mg/L頭孢霉素、50 mg/L特美汀和1mmol/L硫代硫酸鈉組合對(duì)Jack和Williams82體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)沒有影響。通過對(duì)Jack和Williams82未成熟子葉的GUS瞬時(shí)表達(dá)的研究發(fā)現(xiàn)，基因型影響著大豆未成熟子葉的轉(zhuǎn)化，Williams82未成熟子葉的GUS瞬時(shí)表達(dá)率很低，而Jack則顯著高于Williams82。
　　為提高轉(zhuǎn)化效率，本研究進(jìn)一步對(duì)Jack未成熟子葉轉(zhuǎn)化的條件進(jìn)行了優(yōu)化，包括外植體放置方向、農(nóng)