坦布蘇病毒SDS-70株弱毒苗的制備及安全性與免疫效力的初步評(píng)價(jià).pdf

1、鴨坦布蘇病毒感染（TMUV infection）是2010年我國(guó)新發(fā)的一種急性傳染性疾病。TMUV屬于黃病毒科，黃病毒屬，恩塔亞病毒群。TMUV可感染危害多個(gè)品種的鴨，主要造成5-15日齡的雛鴨食欲減退、生長(zhǎng)緩慢和神經(jīng)癥狀，死淘率可達(dá)5％-10%，育成鴨感染后臨床癥狀輕微，死亡率較低，產(chǎn)蛋鴨的產(chǎn)蛋率大幅下降，產(chǎn)蛋率從90%降至10%以下，該病的發(fā)生給我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　免疫預(yù)防是防控TMUV感染的重要措施之一，本

2、研究利用實(shí)驗(yàn)室分離到的TMUV SDS株進(jìn)行傳代致弱，利用致弱毒株SDS-70株對(duì)雛鴨進(jìn)行免疫，對(duì)其免疫保護(hù)效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
　　本研究對(duì)從山東省某種鴨場(chǎng)分離的一株TMUV，采用SPF鴨胚和SPF雞胚進(jìn)行交替?zhèn)鞔晒χ氯踉摱局?。?duì)獲得的不同代次的傳代病毒進(jìn)行致弱效果分析，對(duì)不同代次的弱毒株進(jìn)行免疫效果比對(duì)，結(jié)果顯示SDS-70具有較好的免疫原性。
　　對(duì)篩選到的SDS-70傳代毒株進(jìn)行免疫效力的評(píng)價(jià)。7日齡櫻桃谷鴨（無(wú)TMU

3、V母源抗體），每只腿肌注射102.46EID50的SDS-70的弱毒疫苗，20日齡進(jìn)行第2次免疫，在2免后一周，利用同源強(qiáng)毒SDS-10對(duì)免疫組和對(duì)照組分別進(jìn)行攻毒，攻毒劑量為1mL（102.9ELD50）。免疫后，觀察各組精神狀態(tài)并記錄；定期采血檢測(cè)抗體水平；定期采集免疫組與同居感染組的泄殖腔棉試子，利用熒光定量RT-PCR方法進(jìn)行排毒情況的檢測(cè)；定期剖殺，采集各組織器官進(jìn)行帶毒情況檢測(cè)與病理組織學(xué)研究。結(jié)果免疫組和對(duì)照組均精神狀態(tài)良

4、好，無(wú)明顯的臨床癥狀和病理變化，無(wú)發(fā)病和死亡情況。病理組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，脾臟出現(xiàn)出血，后期出血減輕，心肌出現(xiàn)輕微水腫現(xiàn)象，其余各組織器官均無(wú)明顯的病理學(xué)損傷，結(jié)果表明 SDS-70對(duì)雛鴨無(wú)致病性，免疫性和安全性良好。攻毒試驗(yàn)結(jié)果顯示SDS-70免疫過(guò)的櫻桃谷鴨對(duì)強(qiáng)毒SDS-10的攻擊具有100%的臨床保護(hù)力。
　　對(duì)SDS-70弱毒疫苗進(jìn)行純凈性檢測(cè)，包括支原體、細(xì)菌和外源病毒的檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果均為陰性，說(shuō)明該弱毒疫苗純凈。將 S

5、DS-70在鴨體內(nèi)連續(xù)傳代5次，各代次的試驗(yàn)鴨均無(wú)臨床癥狀，精神良好，剖檢內(nèi)臟組織器官無(wú)病理變化，收集各個(gè)代次的病料進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果為陽(yáng)性，表明SDS-70具有良好的穩(wěn)定性，體內(nèi)傳代后毒力無(wú)返強(qiáng)情況。
　　對(duì)20、40、60、80和100代次的傳代毒株進(jìn)行全基因組序列分析，與SDS原始毒株全基因組序列相比較，結(jié)果20、40、60、80和100代5個(gè)代次的傳代病毒株共出現(xiàn)了33堿基突變，包括18個(gè)導(dǎo)致氨基酸發(fā)生變化的位點(diǎn)和

6、15個(gè)中性突變點(diǎn)。對(duì)E蛋白氨基酸序列上的N-連接的潛在糖基化位點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)，根據(jù)預(yù)測(cè)結(jié)果可以看出，在SDS-80代次時(shí)在E基因上出現(xiàn)了一個(gè)糖基化位點(diǎn)的缺失，根據(jù)氨基酸變化分析可知，該糖基化位點(diǎn)的缺失是由于E蛋白154位上N變?yōu)镠，改變了糖基化位點(diǎn)的固有結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致該位點(diǎn)消失。據(jù)此推測(cè)病毒毒力的改變可能是堿基的突變所導(dǎo)致的。
　　綜上所述，SDS-70弱毒疫苗株對(duì)櫻桃谷鴨安全性、純凈性與免疫效力較好，并且毒力穩(wěn)定，可以作為T(mén)MUV弱毒疫