QX型雞傳染性支氣管炎弱毒苗的制備及其安全性與免疫效力初步評(píng)價(jià).pdf

1、雞傳染性支氣管炎（Infectious bronchitis，IB）是由雞傳染性支氣管炎病毒(Infectiousbronchitis virus，IBV)引起的一類(lèi)急性、高度接觸傳染性疾病。弱毒活疫苗主要用于該病的防御，但常用IB疫苗已不能對(duì)流行株提供有效的免疫保護(hù)，開(kāi)展能對(duì)流行毒株提供有效保護(hù)的弱毒疫苗的研究勢(shì)在必行。
　　本試驗(yàn)所用毒株SDZB0808是在山東某雞場(chǎng)商品肉雞中分離得到。對(duì)SDZB0808全基因組測(cè)序和遺傳演化

2、分析表明該毒株屬目前我國(guó)主要流行株;交叉中和實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該毒株抗原譜較廣，產(chǎn)生的抗體能和多種血清型抗原發(fā)生交叉中和反應(yīng)，適合作為候選疫苗毒株。SDZB0808在SPF雞胚被連續(xù)傳代致弱，本研究對(duì)獲得不同代次的子代病毒進(jìn)行致弱效果分析，P100和P110均有良好的保護(hù)效果。
　　對(duì)SDZB0808毒株和P100進(jìn)行全基因序列分析:從P62開(kāi)始，以后的每個(gè)代次都在3244-3273位點(diǎn)連續(xù)性缺失30個(gè)核苷酸，導(dǎo)致ORF1a編碼的蛋白在

3、906-915位缺失10個(gè)氨基酸。根據(jù)傳代前后基因型的缺失差異，設(shè)計(jì)特異性引物，沒(méi)有氨基酸缺失的基因組命名為QD基因組，缺失氨基酸的基因組為RD基因組;利用SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)方法對(duì)P60、P100和P110存在的不同基因組進(jìn)行定量分析。研究結(jié)果表明兩種基因組在不同代次中存在的比例不同，且呈逐步下降的趨勢(shì)。SDZB0808毒力致弱可能與其基因組序缺失10個(gè)氨基酸有關(guān)，在雞胚上傳代致弱的機(jī)理可能是雞胚對(duì)弱毒基因的定向選擇

4、性篩選的結(jié)果。具體的定向篩選弱毒基因機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。
　　本研究對(duì)初步篩選的P100進(jìn)行疫苗相關(guān)的初步評(píng)價(jià)，P100以105.5EID50點(diǎn)眼、滴鼻免疫3日齡SPF雞后，試驗(yàn)雞與對(duì)照組均精神良好，無(wú)明顯臨床癥狀和病理變化，氣管和腎臟組織也無(wú)病理組織學(xué)損傷，發(fā)病率與死亡率均為0％，表明P100對(duì)雛雞無(wú)致病性，具有良好的安全性。P100以104.5EID50點(diǎn)眼、滴鼻免疫SPF雞，2周后用同源強(qiáng)毒SDZB0808和異源強(qiáng)毒SDI

5、B821/2012分別攻毒，攻毒劑量106.0EID50。結(jié)果表明:P100免疫過(guò)的雞對(duì)強(qiáng)毒的攻擊具有100％的臨床保護(hù)。P100在雞體內(nèi)連續(xù)傳代5代，每個(gè)代次的試驗(yàn)雞均無(wú)臨床特征出現(xiàn)，精神良好，收集各個(gè)代次的病料進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果為陽(yáng)性，接種10 dSPF雞胚，雞胚出現(xiàn)明顯的病理變化，這表明P100具有良好的穩(wěn)定性，雞胚傳代后毒力無(wú)返強(qiáng)。
　　綜上所述，初步評(píng)價(jià)P100對(duì)雞安全性良好，免疫效力合格，并且毒力穩(wěn)定，可以作為