雞傳染性支氣管炎病毒tl-CH-LDT3-03的雞胚傳代致弱及其免疫效力的初步評價.pdf

1、本文對雞傳染性支氣管炎病毒tl/CH/LDT3/03的雞胚傳代致弱及其免疫效力進行了探討。本研究以tl/CH/LDT3/03毒株為研究對象，通過SPF雞胚連續(xù)傳代致弱，以期制備一株IB弱毒疫苗的候選毒株。每個代次毒經(jīng)尿囊腔接種3枚9～11日齡的SPF雞胚，37℃孵育，每日觀察雞胚兩次。72h后觀察雞胚病變情況，無菌收集雞胚尿囊液，并選擇72h未死，但病變典型，尿囊液清亮的雞胚進行下一次傳代。根據(jù)雞胚死亡時間及病變情況確定是否進行稀釋及稀

2、釋倍數(shù)，一般稀釋10<'-1>～10<'-4>。tl/CH/LDT3/03毒株在SPF雞胚傳代過程中，病毒滴度較高，接種雞胚病變典型，毒株高度適應雞胚。與之相反，其對SPF雛雞的致病力隨雞胚傳代次數(shù)的增加而逐漸降低。tl/CH/LDT3/03第3代病毒(P3)對雛雞的發(fā)病率和死亡率分別高達100％和80％；而當tl/CH/LDT3/03第120代病毒(P120)接種SPF雛雞后，無臨診發(fā)病癥狀，表明tl/CH/LDT3/03毒株在SPF

3、雞胚上傳至P120時已經(jīng)充分致弱。通過免疫雞血清抗體變化情況、攻毒后臨診癥狀觀察以及氣管和腎臟的保護效果三個方面對弱毒株tl/CH/LDT3/03 P120的免疫效力進行初步評價。結果顯示，tl/CH/LDT3/03P120接種雛雞后20天，抗體陽性率為100％，而對照組雞血清抗體均為陰性，tl/CH/IDT3/03P120可誘導良好的體液免疫應答；使用同源強毒tl/CI-FLDT3/03 P3攻擊后，免疫組雛雞無發(fā)病癥狀，而對照組雛雞

4、表現(xiàn)明顯的呼吸道癥狀，且在攻毒后第4天有2只雞死亡，第5天有4只雞死亡，初步表明tl/CH/LDT3/03 P120弱毒株可對同源強毒提供有效的保護作用；對攻毒后5天的雛雞氣管和腎臟進行病毒分離發(fā)現(xiàn)，tl/CH/LDT3/03 P120可對70.1％的雛雞氣管和腎臟提供保護，這可能分別與病毒誘導的粘膜免疫及IB特異性循環(huán)抗體有關。綜上所述，弱毒株tl/CH/LDT3/03 P120具有良好的免疫原性，可對雛雞提供較好的免疫保護作用，是理