表達(dá)雞Ⅱ型干擾素基因和雞傳染性支氣管炎病毒S1基因重組雞痘病毒的構(gòu)建及免疫效力的研究.pdf

1、傳染性支氣管炎(IB)是雞的主要呼吸道疾病之一,給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的損失.S1蛋白是IBV主要的免疫原蛋白之一.盡管傳統(tǒng)方法制備的疫苗在疾病的控制上曾經(jīng)發(fā)揮了重要的作用,但現(xiàn)在需要的是更安全并容易和野生型病毒分離的新型疫苗.在這些方面,禽痘病毒載體疫苗有其特有的優(yōu)勢,構(gòu)建了許多表達(dá)禽類病原體主要免疫原基因的重組禽痘病毒,而且已有部分產(chǎn)品投入使用.但是重組疫苗的免疫力與常規(guī)疫苗的免疫水平還存在一定的差距,所以提高重組禽痘病毒疫苗的免疫效力

2、對于面臨疾病威脅的養(yǎng)禽業(yè)有著特別重要的意義.干擾素具有抗病毒、抗腫瘤活性,是重要的免疫調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子,它是由抗原或有絲分裂原激活的T細(xì)胞所合成、分泌的,對免疫系統(tǒng)的多種細(xì)胞具有調(diào)控作用.IFN-Ⅱ可促進(jìn)抗原提呈細(xì)胞中主要組織相容性復(fù)合物的表達(dá),從而放大體液免疫和細(xì)胞免疫.在體外既可以單獨應(yīng)用于疾病的防治,又可以與基因工程疫苗聯(lián)合應(yīng)用增強(qiáng)和改善其免疫效果.該研究分別構(gòu)建出了在雞痘病毒早晚期啟動子LP2EP2控制下的雞IFN-Ⅱ轉(zhuǎn)移載體和雞

3、IFN-Ⅱ+IBV S1基因重組雞痘病毒轉(zhuǎn)移載體.將轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)染至雞痘親本毒S-FPV-017預(yù)感染后的CEF中,經(jīng)過數(shù)輪藍(lán)斑篩選和純化獲得重組雞痘病毒rFPV-IFN-Ⅱ和rFPV-IFN-Ⅱ-S1.PCR檢測證明rFPV-IFN-Ⅱ和rFPV-IFN-Ⅱ-S1基因組中包含IFN-Ⅱ基因和S1基因.Western blotting和間接免疫熒光檢測表明,rFPV-IFN-Ⅱ-S1表達(dá)了S1基因和IFN-Ⅱ基因.為了檢測重組禽痘病毒rF

4、PV-IFN-Ⅱ-S1對SPF雞的保護(hù)效果以及雞IFN-Ⅱ的佐劑效應(yīng),將112只四周齡的SPF雞分平均為7組,分別接種rFPV-IFN-Ⅱ、S-FPV-017、rFPV-IFN-Ⅱ+IB弱毒苗、rFPV-IFN-Ⅱ-S1、rFPV-IBVS1、IB弱毒苗,并設(shè)立非免疫雞為對照.抗體檢測結(jié)果表明rFPV-IFN-Ⅱ-S1免疫后只能引起微弱的IBV抗體,明顯低于rFPV-IBVS1和IB弱毒苗免疫組.但攻毒后,rFPV-IFN-Ⅱ-S1提供

5、的保護(hù)力卻好于rFPV-IBVS1和IB弱毒苗.攻毒后的病毒分離和PCR檢測結(jié)果表明:rFPV-IFN-Ⅱ+IB弱毒苗、rFPV-IFN-Ⅱ-S1在第8d就為陰性,rFPV-IBVS1、rFPV-IFN-Ⅱ、IB弱毒苗免疫組在第10d為陰性,而S-FPV-017和對照組在第12d才全部為陰性.病理切片觀察結(jié)果表明:rFPV-IFN-Ⅱ-S1和商品化的IB弱毒疫苗效果相當(dāng),只有輕微的病變,rFPV-IFN-Ⅱ+IB弱毒苗免疫雞幾乎沒有病變