活化的TLR4及ADMA對人臍血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究人臍帶血中兩種類型內(nèi)皮祖細(xì)胞的體外分化特征。 方法：采用6％羥乙基淀粉沉降法和密度梯度離心法聯(lián)合分離臍帶血中單個核細(xì)胞，在含有血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。通過形態(tài)學(xué)、免疫熒光、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和流式細(xì)胞法分析細(xì)胞的生長特點(diǎn)和生物學(xué)特征。 結(jié)果：貼壁細(xì)胞分為早期內(nèi)皮祖細(xì)胞和晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞兩種類型細(xì)胞。早期內(nèi)皮祖細(xì)胞的形態(tài)從小的圓形細(xì)胞變成以集落

2、為中心，周圍呈發(fā)芽式向外生長的細(xì)胞群，晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞形成典型的“鋪路石樣”。DiL標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍?DiL-acLDL)和FITC標(biāo)記荊豆凝集素I(FITC-UEA-I)雙染色陽性細(xì)胞初步鑒定為內(nèi)皮祖細(xì)胞。RT-PCR提示隨著培養(yǎng)時間延長，內(nèi)皮特異性基因表達(dá)變化逐漸增強(qiáng)，流式細(xì)胞分析提示早期：EPC有AC133、CD34、KDR表達(dá)；晚期EPCsAC133不表達(dá)，CD34表達(dá)弱，KDR表達(dá)增強(qiáng)。四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法提示