酸性成纖維細胞生長因子對人臍血內皮祖細胞影響的實驗研究.pdf

1、【目的】
　　 觀察酸性成纖維細胞生長因子（acid fibroblast growth factor,aFGF）對體外培養(yǎng)人臍血內皮祖細胞(endotheliAlprogenitor cells,EPCs)生物學功能及凋亡的響，進一步探討其作用機制。旨在為體外擴增EPCs尋找可能的誘導劑，從而獲取數(shù)量充足且功能良好的血管組織工程細胞。
　　 【方法】
　　 采用密度梯度離心法從人臍帶血獲取單個核細胞，貼壁法對細

2、胞進行培養(yǎng)。用包含有VEGF和bFGF的M199培養(yǎng)液對貼壁細胞培養(yǎng)7d后，胰酶將貼壁細胞消化下來后供實驗用。并通過如下方法對EPCs進行鑒定：倒置顯微鏡下對細胞形態(tài)進行觀察；激光共聚焦顯微鏡對EPCs結合FITC-UEA-I和吞噬Dil-acLDL
　　 的功能進行鑒定；免疫組化檢測Ⅷ因子表達；流式細胞儀對細胞表面抗體CD34、VEGFR2、CD133進行測定。
　　 培養(yǎng)7d后，收集貼壁細胞并將其隨機分成4組，并分別

3、向不含有其它細胞生長因子的M199培養(yǎng)液中加入aFGF 0μg/L（對照組）、2μg/L、5μg/L、10μg/L分別干預培養(yǎng)6h、12h、24h、48h，再對細胞進行計數(shù)。CCK-8試劑盒、改良的Boyden小室法、貼壁法及流式細胞儀分別檢測aFGF對EPCs增殖、遷移、黏附功能及凋亡率的影響，24h后用RT-PCR技術檢測細胞Bcl-2 mRNA表達。對EPCs的數(shù)量及生物學功能用不同劑量aFGF干預后在不同時間點進行時效關系觀察，

4、并進一步探討aFGF抑制EPCs凋亡的機制。
　　 【結果】
　　 密度梯度離心法獲取單個核細胞后，貼壁法可成功對細胞進行培養(yǎng)，貼壁細胞通過鑒定證實為EPCs。與對照組比較，aFGF可以顯著提高EPCs的生物學功能并抑制其凋亡（P＜0.05）；本研究5μg/L aFGF作用24h對EPCs多數(shù)生物學功能及凋亡抑制的影響最為顯著，其中黏附功能在aFGF 10μg/L作用12h后改善最為明顯（P＜0.05）；在aFGF對EP

5、Cs作用24h后，與對照組比較，不同濃度的aFGF 均可使人臍血EPCs的Bcl-2 mRNA表達效果顯著增強，其中5μg/L aFGF組效果最為顯著（P﹤0.05）。
　　 【結論】
　　 1．可利用密度梯度離心法從臍血內分離的單個核細胞中培養(yǎng)出EPCs,貼壁法可對細胞進行培養(yǎng)，貼壁細胞證實為EPCs。
　　 2．aFGF可以提高EPCs的生物學功能并抑制其凋亡。
　　 3．本研究，5μg/L aFGF