干細(xì)胞來源DC與CIK共培養(yǎng)抗K562-A02及其干細(xì)胞的體外研究.pdf

1、分類號(hào)：R55密級(jí)：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位團(tuán)專業(yè)學(xué)位口O學(xué)校代碼：學(xué)號(hào)：學(xué)科門類：1O0622010602621醫(yī)學(xué)又肄簣科矢垮T|矗NJINMEDICAL鞠NlV差RSlTY碩士學(xué)位論文MLASTER’SDISSERL蜘【ION論文題目：干細(xì)胞來源DC與CIK共培養(yǎng)抗K562／A02及其干細(xì)胞的體外研究TITLECytotoxicityeffectofDCderivedfromstemcellsCOculturewithCIKonK562

2、／A02andtheirstemcells一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：內(nèi)科學(xué)血液病學(xué)論文作者：梁芳芳指導(dǎo)教師：龐華教授導(dǎo)師組成員：司玉玲教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目前公認(rèn)白血病耐藥與復(fù)發(fā)的根本原因是由于患者體內(nèi)殘存有白血病干細(xì)胞(1eukemicstemcell，LSC)。一般傳統(tǒng)的化療藥物只能清除大部分白血病細(xì)胞，而對(duì)具有自我保護(hù)機(jī)制的LSC不敏感，使得我們當(dāng)前使用的許多化療藥物不能從根本上

3、治愈白血病，因此尋找針對(duì)LSC的治療措施至關(guān)重要。近年來生物免疫治療已成為研究熱點(diǎn)，特別是有關(guān)DC和CIK聯(lián)合針對(duì)各種腫瘤細(xì)胞的免疫治療研究很多，已被眾多學(xué)者認(rèn)為是具有較大潛力的治療措施。本實(shí)驗(yàn)的特色即在于通過干細(xì)胞來源DC與CIK聯(lián)合對(duì)白血病細(xì)胞株干細(xì)胞進(jìn)行殺傷，探討其殺傷與凋亡機(jī)制，從而為研究針對(duì)LSC的治療方法提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。。目的證實(shí)慢性粒細(xì)胞白血病(CML)源干細(xì)胞能體外擴(kuò)增誘導(dǎo)生成樹突細(xì)胞(DC)，且該DC具有CML干細(xì)

4、胞的特征；分析DC、CIK共培養(yǎng)前后細(xì)胞免疫表型的變化；探討其與相同CML來源的CIK共培養(yǎng)，對(duì)白血病耐藥株K562／A02干細(xì)胞的殺傷及凋亡作用，從而為細(xì)胞免疫治療清除LSC提供一定的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法用Ficoll淋巴細(xì)胞分離法提取BCR／ABL陽性表達(dá)的CML患者骨髓的單個(gè)核細(xì)胞(BMMC)，利用流式分選技術(shù)分離純化CD34CD38‘白血病干細(xì)胞(LSC)，利用細(xì)胞因子體外擴(kuò)增誘導(dǎo)生成DC。取相同來源的CML骨髓提取單個(gè)核細(xì)

5、胞誘導(dǎo)出CIK。DC與CIK按1：10的比例共培養(yǎng)，通過流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測其對(duì)白血病耐藥株K562／A02干細(xì)胞的凋亡及殺傷情況。光鏡下觀察DC、CIK細(xì)胞形態(tài)，電鏡下觀察DC超微結(jié)構(gòu)，F(xiàn)CM分析DC和CIK共培養(yǎng)前后細(xì)胞免疫表型變化、K562／A02及DC的P糖蛋白(PgP)表達(dá)情況，熒光原位雜交(FISH)技術(shù)檢測BCR／ABL融合基因在LSC及DC中的表達(dá)。結(jié)果1白血病干細(xì)胞能成功誘導(dǎo)為成熟DC且該DC具有CMLLSC的特征