再障小鼠外周血IL-11及其受體水平的研究.pdf

1、研究目的： 再生障礙性貧血(aplastic anemia，AA)是一組由化學、物理、生物、藥物、不明原因等引起的骨髓干細胞及造血微環(huán)境損傷，以致全血細胞減少的疾病，該病是小兒時期較多見的貧血之一。近年來隨著分子生物學、免疫學的發(fā)展以及通過大量的前瞻性臨床研究證明，免疫介導特別是眾細胞因子的參與，各因子之間相互影響、相互促進，是導致再障發(fā)生的重要原因。與此病密切相關的白細胞介素-11(IL-11)就是近年來大家研究和開發(fā)的一個

2、新寵兒。 IL-11是起源于骨髓基質細胞的一種造血生長因子，具有多種生物學活性。其能夠協(xié)同白細胞介素-3(IL-3)、干細胞因子(SCF)促進原始祖細胞的增殖，促進巨核細胞的分化、成熟和血小板的生成，刺激紅細胞的生成，協(xié)同SCF促進骨髓集落細胞的生成，分泌生長因子，協(xié)同甲狀旁腺素(PTH)刺激破骨細胞的生長，以致骨節(jié)的形成。另外IL-11還具有參與上皮細胞的正常生長調控，刺激海馬神經(jīng)祖細胞的增殖，抑制脂肪形成(故IL-11又

3、稱脂肪形成抑制因子)，降低發(fā)熱及炎癥反應，調節(jié)細胞外基質代謝等作用。 自從1997年10月，美國FDA批準rhIL-11(重組人IL-11，商品名oprelvekin)應用于預防非髓性惡性疾病患者化療后并發(fā)的嚴重血小板減少癥以來，針對其臨床應用的研究逐漸增多。大量研究證明IL-11可用于治療化療或骨髓衰竭引起的血小板減少，甚至對粒、紅兩系也有不同程度的提升作用。還有研究證明IL-11可直接影響T細胞及其受體的功能，在體

4、內外均可抑制白細胞介素-12(IL-12)、干擾素-α(IFN-α)、白細胞介素-1β(IL-1β)、白細胞介素-6(IL-6)、一氧化氮(NO)等關鍵性免疫刺激因子的產(chǎn)生，這些因子可以導致T輔助細胞1/T輔助細胞2(Thl/Th2)比例失調，增加了AA的發(fā)病機率。另外有學者進行臨床研究發(fā)現(xiàn)大多數(shù)AA患兒血清中l(wèi)L-11水平正?；蚱?，少數(shù)患兒IL-11水平高于正常，提出IL-11可能在發(fā)病機制中有一定的作用。 然而眾多研究中我們

5、也發(fā)現(xiàn)，IL-ll起效率并不是太高，通常只有一半左右的患者出現(xiàn)有效反應，是否起效患者是由于自身IL-11缺乏，以致于補充后出現(xiàn)療效，而那些無效患者是否血中存在有IL-11受體(IL-11R)的不應答或受體的缺失，導致了不能對其細胞因子IL-11產(chǎn)生應答?？傊瓵A血中IL-11及其受體的水平以及其相互之間的關系，目前仍未見相關報道。 為此，我們以環(huán)磷酰胺和氯霉素誘導建立了AA的動物模型，檢測其外周血中IL-11及IL-llR的水平

6、，了解兩者之間的關系，進一步探討再生障礙性貧血的發(fā)病機制，試圖為再障的臨床治療提供新的思路。 研究方法： 昆明種小鼠60只，體重25±2g，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，隨機分為2組：對照組(n=20)；AA組(n=40)。 對照組：生理鹽水0.5ml/只，于d1-5天腹腔注射。 AA組：環(huán)磷酰胺(80mg/Kg)+氯霉素(100mg/Kg)，用生理鹽水稀釋為0.5ml/只，于d1-5天腹腔注射。 分別觀察

7、以下指標： 1．各組小鼠發(fā)病及死亡情況。 2．于d0、d8天每只小鼠均剪尾取血，測血常規(guī)，并用網(wǎng)織紅細胞染液染色后推片，計數(shù)網(wǎng)織紅細胞(Ret)百分比。 3．于d0、d5、d10天分別稱量小鼠體重。 4．于d10天隨機抽取對照組10只小鼠，AA組30只小鼠，斷頭取血兩管，肝素抗凝處理，一管用于測定IL-11R水平，另一管2000r/分離心20分鐘后，收集血漿，以測定IL-11水平。 50.將

8、4中處理后的40只小鼠解剖 (1)取脾臟稱重，并以多聚甲醛固定、切片，以觀察造血情況。 (2)取股骨骨髓，緩慢離心后推片，瑞一姬氏復合染液染色后，光學顯微鏡觀察其骨髓造血情況。 6．剩余20只小鼠正常飼養(yǎng)15天，觀察存活及死亡情況。 研究結果： 1．各組小鼠發(fā)病及死亡情況 對照組小鼠進食、活動無明顯改變，無自發(fā)性出血及死亡；AA組小鼠在實驗中出現(xiàn)不同程度的自發(fā)性出血，并有4只小鼠于實驗

9、后期死亡。 2．各組小鼠用藥前后血常規(guī)及網(wǎng)織紅細胞計數(shù)的變化 兩組小鼠用藥前血常規(guī)各項指標WBC、Hb、PLT及Ret計數(shù)均無明顯異常；用藥后第8天，AA組各項指標均較對照組明顯下降(p

10、11R水平的降低，13只小鼠僅有IL-11R水平的下降。 4．各組小鼠用藥前后體重的變化 用藥前后對照組體重無明顯變化(p>0.05)，而AA組體重用藥后明顯減輕(p<0.05)。 5．各組小鼠脾臟重量的變化及造血情況 脾臟/體重重量比兩組之間比較無明顯差異(p>0.05)，對照組小鼠脾臟無萎縮：AA組小鼠脾臟雖稍有萎縮，但均未見髓外造血。 6．各組小鼠骨髓造血情況 對照組骨髓正常，AA組

11、骨髓符合再生障礙性貧血骨髓象。研究結論： 1．一定劑量的環(huán)磷酰胺(80mg/Kg)和氯霉素(100mg/Kg)可誘導建立再生障礙性貧血小鼠模型，且死亡率較低，便于實驗順利進行。 2．再障小鼠血中IL-11受體水平均有下降，而IL-11水平下降者僅占56.67％(17/30)，提示IL-1l在AA發(fā)病機制中起一定作用。 3．沒有足夠量的受體與細胞因子結合，細胞因子就無法正常發(fā)揮作用，但細胞表面有相應細胞因子的