電針聯(lián)合補(bǔ)腎活血方對(duì)PCOS大鼠促排卵后子宮內(nèi)膜容受性的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　子宮內(nèi)膜容受性是指子宮內(nèi)膜能夠接受胚胎著床的能力，容受性良好則囊胚易于著床，妊娠率高。針對(duì)PCOS患者促排卵后子宮內(nèi)膜容受性差，目前主要采用的是補(bǔ)佳樂（雌激素），增加子宮內(nèi)膜厚度的方法，但臨床效果不甚理想，中醫(yī)藥治療療效確切，能明顯減少西藥的不良反應(yīng)。PCOS子宮內(nèi)膜發(fā)育異常且伴有ER、PR、Integrinav?3、HOXA10的表達(dá)異常，本課題在前期研究的基礎(chǔ)上，從促排卵后子宮內(nèi)膜容受性著手，研究電針聯(lián)合補(bǔ)腎活血中

2、藥對(duì)PCOS促排卵后子宮內(nèi)膜各不同時(shí)期（促排卵后、圍著床期、妊娠早期）容受性的影響，對(duì)臨床防治多囊卵巢綜合征、提高妊娠率及降低流產(chǎn)率具有十分重要的理論意義和實(shí)用價(jià)值。
　　方法：
　　清潔級(jí)21日齡雌性大鼠450只（計(jì)劃310只，由于實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物有脫落補(bǔ)充），于24日齡，40只皮下注射麻油作為正常對(duì)照組（G），模型大鼠皮下注射 DHEA6mg／100g體重／天+0.2ml注射麻油,連續(xù)注射20天。將造模成功的270只大鼠采用

3、隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組（M）、克羅米芬組（CC）、克羅米芬+補(bǔ)佳樂組（CC+PVG）、克羅米芬+電針組（CC+A）、克羅米芬+補(bǔ)腎活血方組（CC+M）、克羅米芬+針?biāo)幗Y(jié)合組（CC+M+A），每組45只。在80日齡，除正常組外，每組取大鼠5只，行陰道涂片觀察動(dòng)情周期、測(cè)血清證實(shí)造模成功。余下每組均于80日齡起進(jìn)行干預(yù)，克羅米芬灌胃：10mg/100g灌胃，每只大鼠（1ml/100g）灌胃；補(bǔ)佳樂0.104mg/kg，每只大鼠（1ml/10

4、0g）灌胃；中藥顆粒按1:1比例，將12g溶入30ml蒸餾水，每只大鼠（1ml/100g）灌胃，均連續(xù)灌胃5天。電針治療：選取關(guān)元、雙側(cè)三陰交、子宮穴,接HANS-200電針治療儀，連續(xù)波，頻率2Hz，強(qiáng)度為1mA，通電20min，1次/d，連續(xù)治療5天。
　　5天治療后，每組取10只做陰道涂片檢查，發(fā)現(xiàn)角化細(xì)胞提示排卵，次日處死大鼠取血清，摘取雙側(cè)卵巢子宮,解剖后觀察情況并稱重。左側(cè)子宮用作HE染色,右側(cè)子宮用做蛋白和基因檢測(cè)。

5、余下每組30只實(shí)驗(yàn)大鼠均于下午6:00與雄鼠按2：1比例合籠,次日早8:00查陰道涂片,以發(fā)現(xiàn)精蟲者記為妊娠第一天（D1）,每組于妊娠D4、D5、D8下午4:00分別處死10只,摘取雙側(cè)子宮，記錄孕鼠數(shù)及胚泡著床數(shù)。光鏡下觀察子宮內(nèi)膜形態(tài)及微血管密度，電鏡下觀察飽飲突。采用SP免疫組化、RT-PCR、Western-blotting檢測(cè)ER、PR、整合素av?3、HOXA10的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.促排卵后排卵率及

6、妊娠情況比較
　　正常組排卵正常，CC+M+A組接近正常組排卵率。且著床率為88％，接近正常組100%。
　　2.促排卵后子宮內(nèi)膜容受性影響
　　2.1子宮內(nèi)膜形態(tài)比較：CC+M+A組與正常組無(wú)明顯差異（P?0.05），與其它幾組在腺體及腺腔等效直徑、面積及子宮內(nèi)膜厚度比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P?0.05）
　　2.2.RT-PCR結(jié)果：各組ER、PR、HOXA10、Integrinav?3 mRNA比較，正常組與C

7、C+M+A組比較明顯升高（P?0.05），CC+M、CC+A、CC+M+A三組之間無(wú)明顯差異（P?0.05）。ER及Integrinav?3mRNA比較，CC+M、CC+A、CC+M+A、CC+PVG四組之間無(wú)明顯差異（P?0.05）；四組均較模型組、CC組升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PR及HOXA10mRNA比較：CC+M+A與CC+PVG組、模型組、CC組比較升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P?0.05）。
　　2.3 Western-blott

8、ing結(jié)果:ER、PR、HOXA10比較基本同RT-PCR結(jié)果。Integrinav?3比較，CC+M+A與CC+PVG組、模型組、CC組比較升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P?0.05）
　　2.4電針聯(lián)合補(bǔ)腎活血方對(duì)促排卵后子宮內(nèi)膜容受性影響：子宮內(nèi)膜形態(tài)上，CC+M+A組與正常組無(wú)差異，提示子宮內(nèi)膜容受性好，通過蛋白及基因測(cè)定，CC+M+A組較正常組在ER、PR、HOXA10、Integrinav?3表達(dá)稍低，但較其它幾組表達(dá)顯著升高。

9、
　　3.大鼠妊娠D4、D5天(圍著床期)子宮內(nèi)膜容受性指標(biāo)比較
　　3.1.子宮飽飲突情況比較：正常組與 CC+M+A組之間無(wú)明顯差異（P?0.05），子宮內(nèi)膜飽飲突發(fā)育完全較高。
　　3.2.免疫組化比較：ER、PR、HOXA10、Integrinav?3在正常組與CC+M+A組中均有陽(yáng)性表達(dá)，二者間無(wú)明顯差異。
　　3.3.RT-PCR結(jié)果：各組ER、PR、HOXA10、Integrinav?3 mRNA比

10、較，CC+M+A組與正常組之間無(wú)明顯差異（P?0.05）。各組ER、PRmRNA比較：與CC+A、CC+M組比較明顯升高（P?0.05），而與CC+PVG、CC、模型組比較有顯著差異（P?0.01）；各組Integrinav?3、HOXA10mRNA比較：與CC+M、CC+A、CC組比較明顯升高（P?0.05），與 CC+PVG、模型組有顯著升高（P?0.01）。
　　3.4.Western-blotting結(jié)果：各組ER、PR、

11、HOXA10、Integrinav?3蛋白比較，CC+M+A組與正常組之間無(wú)明顯差異（P?0.05）。ER、PR蛋白比較：與CC+A組比較明顯升高（P?0.05），與CC+M、CC+PVG、CC、模型組比較有顯著差異（P?0.01）。Integrinav?3、HOXA10蛋白比較：與CC+M、CC+A組比較明顯升高（P?0.05），與CC+PVG、CC、模型組顯著升高（P?0.01）。
　　3.5電針聯(lián)合補(bǔ)腎活血方對(duì)大鼠圍著床期子

12、宮內(nèi)膜容受性影響：子宮飽飲突情況比較，正常組與CC+M+A組之間無(wú)明顯差異（P?0.05），飽飲突發(fā)育完全較高，提示子宮內(nèi)膜容受良好。通過SP免疫組化、RT-PCR、Western-blotting檢測(cè)，CC+M+A組與正常組均在ER、PR、HOXA10、Integrinav?3上較高表達(dá)，且較其它幾組表達(dá)顯著升高。
　　4.大鼠妊娠D8天（妊娠早期）子宮內(nèi)膜容受性指標(biāo)比較
　　4.1.免疫組化比較：CC+M+A組與正常組，

13、二者間無(wú)明顯差異。在ER、PR、HOXA10、Integrinav?3上，與CC+A組、CC+M組、CC+PVG組，三組比較有差異（P?0.05）；與CC組、模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P?0.01）。
　　4.2.RT-PCR結(jié)果：各組ER、PR、HOXA10、Integrinav?3 mRNA比較，正常組與CC+M+A組之間無(wú)明顯差異（P?0.05），與CC+PVG、CC、模型組有顯著升高（P?0.01）。ERmRNA比較，與CC

14、+A組比較明顯升高（P?0.05）。各組Integrinav?3mRNA比較，與CC+A、CC+M組比較明顯升高（P?0.05）。各組PRmRNA、HOXA10mRNA比較，與CC+M比較明顯升高（P?0.05）。
　　4.3.Western-blotting結(jié)果：各組ER、Integrinav?3、HOXA10蛋白比較，CC+M+A組與正常組比較，明顯升高（P?0.05）；與CC+M、CC+A、CC+PVG、CC、模型組比較有顯

15、著差異（P?0.01）。各組PR蛋白比較：CC+M+A組與正常組之間無(wú)明顯差異（P?0.05）,但與 CC+M組比較明顯升高（P?0.05），且與CC+A、CC+PVG、CC、模型組比較有顯著差異（P?0.01）。
　　4.4電針聯(lián)合補(bǔ)腎活血方對(duì)大鼠妊娠早期子宮內(nèi)膜容受性影響：SP免疫組化，CC+M+A組與正常組比較有較高表達(dá)，通過 RT-PCR、Western-blotting檢測(cè)，CC+M+A組在ER、PR、HOXA10、In

16、tegrinav?3上較高表達(dá)，且較其它幾組表達(dá)顯著升高。
　　結(jié)論：
　　在促排卵后、圍著床期、妊娠早期，電針聯(lián)合補(bǔ)腎活血方能顯著改善CC促排卵治療導(dǎo)致的子宮內(nèi)膜容受性不良狀態(tài)。補(bǔ)腎活血中藥、電針在提高子宮內(nèi)膜容受性方面較西藥補(bǔ)佳樂優(yōu)勢(shì)明顯，不僅改善子宮內(nèi)膜容受性，且通過改善子宮內(nèi)膜容受性的同時(shí)改善PCOS大鼠的排卵率，這與電針聯(lián)合補(bǔ)腎活血中藥對(duì)PCOS大鼠激素水平（FSH、LH）的調(diào)節(jié)有關(guān)，電針聯(lián)合補(bǔ)腎活血中藥提高PCO