HEPN1、RASSF3與垂體腺瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　 垂體腺瘤是顱內(nèi)第三大腫瘤。垂體腺瘤在病理上屬于良性腫瘤，但部分病例具有向周圍正常結(jié)構(gòu)如顱骨、硬腦膜、海綿竇、蝶竇、鞍上、鞍旁等侵襲性生長的特點(diǎn)，故臨床上將這一類垂體腺瘤稱之為“侵襲性垂體腺瘤”。由于其侵襲性生長，導(dǎo)致其全切率低，復(fù)發(fā)率高，一直是該病治療的難點(diǎn)。垂體腺瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲的機(jī)制尚不清楚。為此我們進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)以探索其發(fā)生發(fā)展和侵襲的機(jī)制:
　　 (1) HEPN1在垂體腺瘤中的表達(dá)以及功能研究;

2、
　　 (2) DNA甲基化芯片篩選腫瘤相關(guān)基因;RASSF3在垂體腺瘤中的甲基化水平和表達(dá)水平以及功能研究研究。
　　 方法:
　　 針對(duì)以上兩個(gè)方面的研究，研究方法如下:
　　 (1)選取人垂體腺瘤液氮冷凍標(biāo)本27例和腺垂體組織4例。根據(jù)Hardy's分級(jí)，將垂體腺瘤分為2組，其中侵襲性組15例，非侵襲性組12例。
　　 (2)檢測(cè)HEPN1在垂體腺瘤中的表達(dá)情況。比較侵襲性組和非侵襲性組HE

3、PN1mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。構(gòu)建HEPN1過表達(dá)和干擾的慢病毒載體，轉(zhuǎn)染大鼠GH3和小鼠GT1.1垂體腺瘤細(xì)胞，觀察HEPN1表達(dá)水平對(duì)GH3和GT1.1細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲性的影響。檢測(cè)HEPN1過表達(dá)和干擾對(duì)Bax、Bcl-2、p53、Casepase-3、Casepase-9、MMP-2、MMP-9表達(dá)水平的影響。
　　 (3)運(yùn)用DNA甲基化芯片篩選侵襲性組和非侵襲性組異常甲基化的基因，在生物學(xué)信息分析后，篩選

4、重要基因進(jìn)行功能研究。
　　 (4)焦磷酸測(cè)序法驗(yàn)證RASSF3在垂體腺瘤中的甲基化水平。比較侵襲性組和非侵襲性組RASSF3 mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。在大鼠、小鼠正常垂體組織和GH3和小鼠GT1.1垂體腺瘤細(xì)胞中，檢測(cè)RASSF3甲基化水平、表達(dá)水平。去甲基化藥物5-阿扎胞苷處理GH3和GT1.1細(xì)胞，觀察RASSF3甲基化水平、表達(dá)水平的變化。構(gòu)建RASSF3過表達(dá)和干擾的慢病毒載體，轉(zhuǎn)染GH3和GT1.1細(xì)胞，觀察

5、RASSF3表達(dá)水平對(duì)GH3和GT1.1細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲性的影響。檢測(cè)RASSF3過表達(dá)和干擾對(duì)Bax、Bcl-2、p53、Casepase-3、Casepase-9、MMP-2、MMP-9表達(dá)水平的影響。
　　 結(jié)果:
　　 (1)垂體腺瘤中HEPN1表達(dá)水平低于正常垂體組織，侵襲性組中HEPN1表達(dá)水平低于非侵襲性組。在GH3和GT1.1細(xì)胞中過表達(dá)HEPN1可抑制腺瘤細(xì)胞增殖和侵襲，促進(jìn)垂體腺瘤細(xì)胞凋亡。沉默H

6、EPN1可促進(jìn)腺瘤細(xì)胞增殖和侵襲，抑制垂體腺瘤細(xì)胞凋亡。
　　 (2)人垂體腺瘤中RASSF3甲基化水平高于人正常垂體組織，侵襲性組和非侵襲性組RASSF3甲基化水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。人垂體腺瘤中RASSF3表達(dá)水平低于人正常垂體組織，侵襲性組和非侵襲性組RASSF3表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在大鼠GH3垂體瘤細(xì)胞系中，RASSF3甲基化水平高于與大鼠正常垂體組織，而表達(dá)水平低于正常垂體組織。小鼠GT1.1垂體瘤細(xì)胞RASSF3

7、甲基化水平高于小鼠正常垂體組織，表達(dá)水平低于正常垂體組織。
　　 對(duì)GH3和GT1.1細(xì)胞進(jìn)行去甲基化藥物5-阿扎胞苷處理，RASSF3甲基化水平降低，表達(dá)水平增高。在GH3和GT1.1細(xì)胞中過表達(dá)RASSF3可抑制腺瘤細(xì)胞增殖和侵襲，促進(jìn)垂體腺瘤細(xì)胞凋亡，沉默RASSF3可促進(jìn)腺瘤細(xì)胞增殖，抑制腺瘤細(xì)胞凋亡，但RASSF3表達(dá)水平與腫瘤侵襲性無明顯關(guān)系。
　　 結(jié)論:
　　 (1) HEPN1下調(diào)可促進(jìn)垂體腺瘤