作用于β淀粉樣蛋白的藥物篩選與分析及其相關(guān)機(jī)理初探.pdf

1、隨著老年人口比重的不斷上升，老年人的精神衛(wèi)生問題日漸突出，尤其是危害最嚴(yán)重的老年性癡呆病人越來越多。癡呆嚴(yán)重影響老年人的生活質(zhì)量，并且給國(guó)家、社會(huì)和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。研究老年性癡呆的發(fā)病機(jī)制、尋找有效的治療方法已經(jīng)成為當(dāng)前醫(yī)學(xué)科學(xué)關(guān)注的焦點(diǎn)之一。在老年性癡呆的治療研究中，篩選以天然植物藥為主體的天然藥物，研制出先導(dǎo)化合物來開發(fā)創(chuàng)新藥物，具有極大的市場(chǎng)開發(fā)潛力。 目的： 以阿爾茨海默病發(fā)病的關(guān)鍵分子β淀粉樣蛋白為靶，從一

2、系列候選的天然產(chǎn)物中篩選出能夠影響β淀粉樣蛋白產(chǎn)生和聚集的有效藥物，繼而分離、提純和鑒定有效藥物中的單體活性成分，為化合物結(jié)構(gòu)的進(jìn)一步改造及其生物學(xué)活性的改善奠定基礎(chǔ)。最后比較不同化合物抑制B淀粉樣蛋白產(chǎn)生和聚集的效果，并初步探討其中可能存在的藥理作用機(jī)制。 方法： 1、建立β淀粉樣蛋白體外老化模型，采用硫磺素T熒光分析，通過體外孵育方式觀察候選藥物干預(yù)β淀粉樣蛋白聚集和纖維形成作用；繼而通過圓二色光譜儀檢測(cè)β淀粉樣蛋白

3、二級(jí)結(jié)構(gòu)的變化情況。 2、利用轉(zhuǎn)染APP瑞典型突變基因(APP695cDNA)的HEK293細(xì)胞模型，應(yīng)用MTT法評(píng)估候選藥物的細(xì)胞毒性，并運(yùn)用蛋白印跡法檢測(cè)藥物干預(yù)后β淀粉樣蛋白含量變化。 3、采用柱層析法、重結(jié)晶法由姜黃中分離純化出三種化合物，分別采用薄層層析法和高效液相色譜儀對(duì)分離產(chǎn)物進(jìn)行純度鑒定，使用質(zhì)譜法測(cè)定各自的分子量。 4、利用HEK細(xì)胞模型，比較三種化合物抑制β淀粉樣蛋白產(chǎn)生的能力。 5、

4、所有數(shù)據(jù)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： 1、隨著β淀粉樣蛋白孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，熒光強(qiáng)度逐漸增加，尤其是48h熒光強(qiáng)度明顯升高。 2、細(xì)辛腦以及丹皮酚能夠抑制β淀粉樣蛋白聚集，但對(duì)已聚集的纖維無影響作用。姜黃能夠抑制β淀粉樣蛋白聚集，存在劑量依賴效應(yīng)，同時(shí)對(duì)已聚集的纖維有一定影響作用。 3、姜黃抑制β淀粉樣蛋白聚集主要通過其二級(jí)結(jié)構(gòu)的改變，由β折疊為主轉(zhuǎn)變成α螺旋為主。 4、姜黃能夠劑量依賴地

5、抑制β淀粉樣蛋白生成。 5、從姜黃分離純化出三種有效單體成分，分別為姜黃素、脫甲氧基姜黃素和雙脫甲氧基姜黃素。 6、三種姜黃素類化合物都能劑量依賴地抑制β淀粉樣蛋白生成，其中以姜黃素的抑制能力最為明顯。 結(jié)論： 本課題組成功構(gòu)建的β淀粉樣蛋白體外老化模型和轉(zhuǎn)染APP瑞典型突變基因(APP695cDNA)的HEK293細(xì)胞模型可作為藥物篩選的理想體外模型，用于初篩作用于β淀粉樣蛋白途徑的藥物和進(jìn)一步的藥理機(jī)