Bif-1在肝癌中的生物學(xué)功能及作用機(jī)制研究.pdf

1、肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上腫瘤發(fā)病率中第五名,在中國(guó)占第二位,每年約有32萬(wàn)肝癌病例,約占全球發(fā)病率的55％。由于早期癥狀不典型,臨床確診的肝癌多數(shù)已是肝癌的三到四期,并伴有門(mén)脈癌栓形成或肺轉(zhuǎn)移。大約90％以上腫瘤所致的死亡要?dú)w咎于腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。因此,研究腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生機(jī)制及抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的治療手段是腫瘤防治中的重要環(huán)節(jié)。
　　研究目的:
　　通過(guò)對(duì)Bif-1影響細(xì)胞增殖和移動(dòng)的

2、分子機(jī)制及其相互作用的研究,深入探討腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,為抑制腫瘤轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)提供新的靶點(diǎn)和理論依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　第一部分 Bif-1在肝癌中的表達(dá)及其與臨床預(yù)后的關(guān)系
　　通過(guò)檢測(cè)肝癌和癌旁組織樣本中Bif-1在mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)水平,進(jìn)一步明確其在成對(duì)的樣本中的表達(dá)趨勢(shì),并且組織芯片將目的基因在不同組織樣本中的表達(dá)情況與臨床資料相互聯(lián)系,分析Bif-1與肝癌患者腫瘤大小、腫瘤分期、轉(zhuǎn)移、癌栓形

3、成、腫瘤復(fù)發(fā)等臨床特征之間的關(guān)系,并對(duì)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的臨床特征在細(xì)胞水平進(jìn)行進(jìn)一步研究,并結(jié)合隨訪結(jié)果探討目的基因與患者預(yù)后(無(wú)瘤生存期和總體生存期)的關(guān)系。
　　第二部分 Bif-1對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及作用機(jī)制研究
　　在不同的肝癌細(xì)胞系中(CSQT-2,MHCCLM3,HepG2)進(jìn)一步用qRT-PCR檢測(cè)目的基因的表達(dá)情況。用RNAi技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行干擾,觀察細(xì)胞相關(guān)的生物學(xué)功能的改變情況。并根據(jù)其生物學(xué)功能的

4、改變進(jìn)一步對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行研究,明確其相互作用及其信號(hào)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。
　　結(jié)果
　　第一部分:
　　RT-PCR結(jié)果顯示在50對(duì)癌和癌旁之中,Bif-1有42對(duì)組織Bif-1的表達(dá)是在癌組織高于癌旁,同時(shí)Western Blot的結(jié)果也反映了同樣的表達(dá)趨勢(shì)。另根據(jù)組織芯片染色和臨床資料統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示Bif-1的表達(dá)與腫瘤的大小,門(mén)靜脈癌栓的形成,腫瘤微血管侵犯和復(fù)發(fā)這四個(gè)臨床指標(biāo)有一定的相關(guān)性。術(shù)后生存分析也發(fā)現(xiàn) Bif

5、-1能夠影響肝癌患者術(shù)后的無(wú)瘤生存期(P=0.035)和總體生存期(P=0.047),因此, Bif-1可望成為一個(gè)新的評(píng)價(jià)肝癌患者預(yù)后的指標(biāo)。
　　第二部分:
　　Bif-1的表達(dá)能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和在裸鼠體內(nèi)的成瘤性。我們發(fā)現(xiàn)在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)Bif-1能促進(jìn)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力(Transwell),侵襲能力(Invasion)和細(xì)胞極性的形成,而干擾Bif-1的表達(dá),則引起細(xì)胞骨架蛋白Cdc42下降及其活性降低,并

6、且Bif-1含量與Cdc42表達(dá)呈正相關(guān)調(diào)控。Bif-1免疫熒光染色揭示Bif-1可出現(xiàn)在細(xì)胞核。,核質(zhì)分離實(shí)驗(yàn)在細(xì)胞核蛋白中證實(shí)了這一結(jié)果。染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)表明Bif-1能夠在基因水平調(diào)控Cdc42的轉(zhuǎn)錄。
　　結(jié)論
　　本課題通過(guò)臨床肝癌樣品,HCC細(xì)胞和各種研究手段,研究了Bif-1在肝癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移等細(xì)胞生物學(xué)行為的作用,揭示了Bif-1在肝癌組織中表達(dá)升高并參與腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。Bif-1調(diào)節(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制是

7、通過(guò)對(duì)影響Cdc42表達(dá)和活性。同時(shí), Bif-1在肝癌組織中的水平,與腫瘤大小和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的發(fā)生有關(guān),后者是影響預(yù)后的主要原因。因此,Bif-1可成為判斷肝癌預(yù)后的一項(xiàng)新指標(biāo),抑制Bif-1的表達(dá)可望成為抑制肝腫瘤的新靶點(diǎn)。
　　本課題創(chuàng)新點(diǎn)及潛在應(yīng)用價(jià)值
　　明確了Bif-1的表達(dá)與肝癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系,為腫瘤的臨床研究提供一定參考依據(jù),并且首次發(fā)現(xiàn)了Bif-1在細(xì)胞核中表達(dá)通過(guò)調(diào)控促進(jìn)Cdc42的轉(zhuǎn)錄和其蛋白的活性促進(jìn)