系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者T淋巴細(xì)胞亞群CD95和CD137信號(hào)傳導(dǎo)途徑異常與淋巴細(xì)胞凋亡紊亂的研究.pdf

1、目的分析系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血T淋巴細(xì)胞的凋亡狀態(tài)，CD95-CD95L信號(hào)傳導(dǎo)通路和CDl37-CDl37L信號(hào)傳導(dǎo)通路在介導(dǎo)T淋巴細(xì)胞亞群凋亡紊亂中的作用；抗核小體抗體與SLE患者淋巴細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)紊亂的關(guān)系，探討SLE患者T淋巴細(xì)胞亞群凋亡紊亂狀態(tài)和凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑的關(guān)系，為發(fā)現(xiàn)SLE患者T細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的異常關(guān)鍵靶位奠定基礎(chǔ)。 方法分析39例SLE患者(包括穩(wěn)定期患者22例，活動(dòng)期患者17例)，13例健

2、康對(duì)照者外周血中淋巴細(xì)胞凋亡紊亂狀態(tài)。采用流式細(xì)胞分析儀結(jié)合Annexin V-FITC／PI雙染色的方法測(cè)定SLE患者和健康對(duì)照者外周血淋巴細(xì)胞的凋亡百分率和壞死百分率。采用流式細(xì)胞分析儀并結(jié)合熒光標(biāo)記單克隆抗體檢測(cè)SLE患者和健康對(duì)照者外周血T淋巴細(xì)胞亞群表面CD95、CD95L和CDl37分子的表達(dá)。結(jié)合FITC標(biāo)記的FAM-DEVD，檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞亞群細(xì)胞質(zhì)中活化caspase-3蛋白酶的表達(dá)。酶聯(lián)免疫吸附分析(EL,IS

3、A)技術(shù)測(cè)定SLE患者組血清中sCD95L、抗核小體抗體的濃度。利用速率散射比濁儀測(cè)定SLE患者血清中補(bǔ)體C3的濃度。應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)或中位數(shù)(四分位數(shù)間距)[median(range)]表示。依據(jù)數(shù)據(jù)的分布特征，正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組間比較，或one-wayANOVA分析進(jìn)行多組間比較，q檢驗(yàn)法進(jìn)行組間兩兩比較；非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn)進(jìn)行配對(duì)資料的兩樣

4、本比較分析，Kruskal-Wallis檢驗(yàn)進(jìn)行多組間比較分析，Nemenyi法進(jìn)行組間兩兩比較。并進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析。 結(jié)果①SLE患者和健康對(duì)照者外周血T細(xì)胞亞群表達(dá)分析顯示：與健康對(duì)照組比較，穩(wěn)定期患者組CD3<'+>T淋巴細(xì)胞和CD3<'+>CD8<'+>T淋巴細(xì)胞比例略有下降但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，CD3<'+>CD4<'+>T淋巴細(xì)胞比例和CD4<'+>T細(xì)胞／CD8<'+>T細(xì)胞比值下降(P<

5、0.05)；而活動(dòng)期患者組CD3<'+>T淋巴細(xì)胞、CD4<'+>T淋巴細(xì)胞和CD8<'+>T淋巴細(xì)胞比例顯著下降(P<0.05)，CD4<'+>T細(xì)胞／CD8<'+>T細(xì)胞比值降低(P<0.05)?；顒?dòng)期患者組和穩(wěn)定期患者組比較，CD3<'+>T淋巴細(xì)胞、CD3<'+>CD4<'+>T淋巴細(xì)胞和CD3<'+>CD8<'+>T淋巴細(xì)胞比例以及CD4<'+>T細(xì)胞／CD8<'+>T細(xì)胞比值無明顯差異(P>0.05)。②SLE患者和健康對(duì)照

6、者淋巴細(xì)胞凋亡百分率和壞死百分率分析顯示：活動(dòng)期和穩(wěn)定期SLE患者組外周血淋巴細(xì)胞凋亡細(xì)胞百分率和壞死細(xì)胞百分率顯著高于健康對(duì)照組(P<0.05)。活動(dòng)期SLE患者組凋亡細(xì)胞百分率略高于穩(wěn)定期SLE患者組(但P>0.05)，壞死細(xì)胞百分率顯著高于穩(wěn)定期患者組(P<0.05)。③SLE患者組和健康對(duì)照組T細(xì)胞凋亡信號(hào)分子CD95的表達(dá)分析顯示：與健康對(duì)照組相比較，活動(dòng)期及穩(wěn)定期SLE患者組CD4<'+>T細(xì)胞表面CD95分子的表達(dá)率均顯著

7、增加(P<0.05)；CD8<'+>T細(xì)胞表面CD95分子的表達(dá)率略有增加但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。活動(dòng)期SLE患者組CD4<'+>T細(xì)胞表面CD95分子的表達(dá)率較穩(wěn)定期SLE患者組略有增加但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；CD8<'+>T細(xì)胞表面CD95分子的表達(dá)率無明顯改變(P>0.05)。SLE患者組CD4<'+>T細(xì)胞表面CD95分子的表達(dá)率，均顯著高于CD8<'+>T細(xì)胞表面CD95分子的表達(dá)率(P<0.05)。對(duì)

8、CD4<'+>T細(xì)胞與CD8<'+>T細(xì)胞表面CD95分子表達(dá)率的比值分析表明，3組間相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。④對(duì)CD95分子的配體CD95L(CD95 ligand)的研究結(jié)果顯示：活動(dòng)期和穩(wěn)定期SLE患者組T細(xì)胞亞群表面CD95L分子的表達(dá)率均顯著高于健康對(duì)照組(P<0.05)?；顒?dòng)期和穩(wěn)定期SLE患者組相比較，T細(xì)胞亞群表面CD95L分子的表達(dá)率無顯著性差異(P>0.05)。無論是SLE患者組還是健康對(duì)照組，對(duì)CD4<

9、'+>T細(xì)胞與CD8<'+>T細(xì)胞表面CD95L分子表達(dá)率的比值分析表明，3組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。⑤進(jìn)一步對(duì)CD95L的可溶性形式sCD95L研究發(fā)現(xiàn)：SLE患者組和健康對(duì)照組比較，血清sCD95L濃度無顯著性差異(P>0.05)。⑥對(duì)具有增殖和凋亡雙重效應(yīng)的共刺激分子CDl37分析結(jié)果顯示：未經(jīng)PHA刺激時(shí)，T淋巴細(xì)胞亞群表面CDl37分子的表達(dá)率在SLE患者組和健康對(duì)照組間無顯著性差異(P>0.05)；經(jīng)PHA刺激

10、48小時(shí)后，活動(dòng)期和穩(wěn)定期SLE患者組CD4<'+>T細(xì)胞表面CDl37分子的表達(dá)率顯著高于健康對(duì)照組(P<0.05)；活動(dòng)期SLE患者組CD8<'+>T細(xì)胞表面CDl37分子的表達(dá)率高于健康對(duì)照組(P<0.05)，而穩(wěn)定期患者組CD8<'+>T細(xì)胞表面CDl37分子的表達(dá)率略高于健康對(duì)照組但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)?；顒?dòng)期患者組和穩(wěn)定期患者組相比較，T細(xì)胞亞群表面CDl37分子的表達(dá)率無顯著性差異(P>0.05)。對(duì)CD4<'

11、+>T細(xì)胞與CD8<'+>T細(xì)胞表面CDl37分子表達(dá)率的比值分析表明，活動(dòng)期SLE患者組高于健康對(duì)照組(P<0.05)。⑦對(duì)SLE患者自身抗體的主要成分——抗核小體抗體濃度測(cè)定顯示：活動(dòng)期SLE患者組血清中抗核小體抗體濃度，顯著高于穩(wěn)定期SLE患者組和健康對(duì)照組(P<0.05)。而穩(wěn)定期SLE患者組與健康對(duì)照組相比，血清中抗核小體抗體濃度水平無明顯改變(P>0.05)。⑧活動(dòng)期SLE患者組血清補(bǔ)體C3濃度低于穩(wěn)定期SLE患者組(P<0

12、.05)。 ⑨相關(guān)性分析結(jié)果顯示：SLE患者凋亡細(xì)胞百分率與抗核小體抗體濃度呈正相關(guān)關(guān)系(r<,s>=0.350，P=0.03 1)，血清C3濃度與凋亡細(xì)胞百分率呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r<,s>=-0.593，P=-0.001)，與抗核小體抗體濃度呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r<,s>=-0.557，P=0.001)。 結(jié)論 ①SLE患者組外周血淋巴細(xì)胞凋亡加速，以CD4<'+>T細(xì)胞凋亡為主。②CD95-CD95L信號(hào)傳導(dǎo)通路在介導(dǎo)SLE患者T

13、細(xì)胞亞群凋亡中的作用不盡相同：CD95-CD95L信號(hào)傳導(dǎo)途徑在介導(dǎo)SLE患者CD4<'+>T細(xì)胞的凋亡中發(fā)揮重要作用，而CD95介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑不是引起SLE患者CD8<'+>T細(xì)胞凋亡的主要途徑，可能存在其他的信號(hào)傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)CD8<'+>T細(xì)胞凋亡。③CDl37-CDl37L介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路在SLE患者T淋巴細(xì)胞凋亡紊亂中并未發(fā)揮作用。④caspase-3蛋白酶是凋亡過程中的關(guān)鍵效應(yīng)蛋白酶，SLE患者T細(xì)胞亞群中存在caspa

14、se-3蛋白酶的活化，而且以CD4<'+>T細(xì)胞尤為顯著，CD95-CD95L活化caspase-3的信號(hào)傳導(dǎo)通路是導(dǎo)致CD4<'+>T細(xì)胞凋亡的主要通路。CD8<'+>T細(xì)胞中活化caspase-3蛋白酶的表達(dá)量增高，但CD8<'+>T細(xì)胞表面CD95分子的表達(dá)率與細(xì)胞質(zhì)中活化caspase-3蛋白酶的表達(dá)率的變化不一致，提示CD8<'+>T細(xì)胞內(nèi)caspase-3蛋白酶的活化效應(yīng)不是主要由CD95-CD95L信號(hào)通路激活。⑤SLE患