結(jié)核病感染過(guò)程中單核細(xì)胞表型變化及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究肺結(jié)核患者外周血單核細(xì)胞(PMNC)表型的改變；探討其可能機(jī)制，從而進(jìn)一步了解和闡明結(jié)核病的免疫學(xué)相關(guān)的發(fā)病機(jī)理，為結(jié)核病治療效果評(píng)價(jià)和疫苗研制提供參考依據(jù)。 方法：應(yīng)用親和層析方法純化大腸桿菌表達(dá)重組的結(jié)核分枝桿菌ESAT-6抗原；利用特異性抗體和流式細(xì)胞儀檢測(cè)肺結(jié)核患者PMNC細(xì)胞表型變化，同時(shí)收集未刺激及結(jié)核菌特異性抗原ESAT-6刺激的稀釋全血培養(yǎng)上清，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子的產(chǎn)生變化，并與正常人標(biāo)本進(jìn)行對(duì)照

2、；體外實(shí)驗(yàn)中，用PPD和H37Rv滅活菌體與人THP-1單核細(xì)胞共培養(yǎng)后，利用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表型變化；在研究ESAT-6誘導(dǎo)人單核細(xì)胞IL-12產(chǎn)生及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)中，采用ELISA法檢測(cè)不同濃度ESAT-6對(duì)刺激人THP-1單核細(xì)胞IL-12產(chǎn)生的影響，以及對(duì)LPS刺激的反應(yīng)，應(yīng)用各種細(xì)胞通路抑制劑來(lái)探討ESAT-6誘導(dǎo)單核細(xì)胞IL-12產(chǎn)生相關(guān)可能的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 結(jié)果：在肺結(jié)核患者PMNC的CD14+單核細(xì)胞亞群數(shù)

3、目較正常人明顯增多，同時(shí)，結(jié)核病人CD14+單核細(xì)胞CD13表面分子高表達(dá)；結(jié)核病人外周血稀釋全血培養(yǎng)4天的上清在未刺激及ESAT-6抗原刺激后均表現(xiàn)為IL-10產(chǎn)生相對(duì)IFN-γ明顯增加的Th2偏向；體外實(shí)驗(yàn)中，PPD和H37Rv在低劑量IL-4與人THP-1單核細(xì)胞共培養(yǎng)后，能明顯誘導(dǎo)細(xì)胞CD13、CD23及DC-SIGN分子表達(dá)增加；另外，研究證明，結(jié)核分枝桿菌ESAT-6分泌抗原在2.5-10μg/ml濃度范圍能依賴性地刺激人T

4、HP-1單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-12(p70及其亞單位p40)。細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路JNKMAPK的選擇性抑制劑SP600125能促進(jìn)ESAT-6刺激單核細(xì)胞IL-12p40產(chǎn)生，而信號(hào)通路PKR抑制劑2-AP有顯著性抑制其作用，且ESAT-6的N末端肽段能引起相同的刺激作用，可能是ESAT-6作用的主要效應(yīng)肽段。 結(jié)論：外周血單核細(xì)胞在結(jié)核病發(fā)病過(guò)程發(fā)生表型改變，單核細(xì)胞數(shù)目增加，同時(shí)CD13表達(dá)明顯增加，結(jié)核分枝桿菌感染或其感染過(guò)程中