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1、目的:研究肺結(jié)核患者外周血單核細(xì)胞(PMNC)表型的改變;探討其可能機(jī)制,從而進(jìn)一步了解和闡明結(jié)核病的免疫學(xué)相關(guān)的發(fā)病機(jī)理,為結(jié)核病治療效果評(píng)價(jià)和疫苗研制提供參考依據(jù)。 方法:應(yīng)用親和層析方法純化大腸桿菌表達(dá)重組的結(jié)核分枝桿菌ESAT-6抗原;利用特異性抗體和流式細(xì)胞儀檢測(cè)肺結(jié)核患者PMNC細(xì)胞表型變化,同時(shí)收集未刺激及結(jié)核菌特異性抗原ESAT-6刺激的稀釋全血培養(yǎng)上清,ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子的產(chǎn)生變化,并與正常人標(biāo)本進(jìn)行對(duì)照
2、;體外實(shí)驗(yàn)中,用PPD和H37Rv滅活菌體與人THP-1單核細(xì)胞共培養(yǎng)后,利用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表型變化;在研究ESAT-6誘導(dǎo)人單核細(xì)胞IL-12產(chǎn)生及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)中,采用ELISA法檢測(cè)不同濃度ESAT-6對(duì)刺激人THP-1單核細(xì)胞IL-12產(chǎn)生的影響,以及對(duì)LPS刺激的反應(yīng),應(yīng)用各種細(xì)胞通路抑制劑來(lái)探討ESAT-6誘導(dǎo)單核細(xì)胞IL-12產(chǎn)生相關(guān)可能的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 結(jié)果:在肺結(jié)核患者PMNC的CD14+單核細(xì)胞亞群數(shù)
3、目較正常人明顯增多,同時(shí),結(jié)核病人CD14+單核細(xì)胞CD13表面分子高表達(dá);結(jié)核病人外周血稀釋全血培養(yǎng)4天的上清在未刺激及ESAT-6抗原刺激后均表現(xiàn)為IL-10產(chǎn)生相對(duì)IFN-γ明顯增加的Th2偏向;體外實(shí)驗(yàn)中,PPD和H37Rv在低劑量IL-4與人THP-1單核細(xì)胞共培養(yǎng)后,能明顯誘導(dǎo)細(xì)胞CD13、CD23及DC-SIGN分子表達(dá)增加;另外,研究證明,結(jié)核分枝桿菌ESAT-6分泌抗原在2.5-10μg/ml濃度范圍能依賴性地刺激人T
4、HP-1單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-12(p70及其亞單位p40)。細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路JNKMAPK的選擇性抑制劑SP600125能促進(jìn)ESAT-6刺激單核細(xì)胞IL-12p40產(chǎn)生,而信號(hào)通路PKR抑制劑2-AP有顯著性抑制其作用,且ESAT-6的N末端肽段能引起相同的刺激作用,可能是ESAT-6作用的主要效應(yīng)肽段。 結(jié)論:外周血單核細(xì)胞在結(jié)核病發(fā)病過(guò)程發(fā)生表型改變,單核細(xì)胞數(shù)目增加,同時(shí)CD13表達(dá)明顯增加,結(jié)核分枝桿菌感染或其感染過(guò)程中
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