幽門螺桿菌γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶基因的克隆和分析.pdf

1、自從1983年Warren和Mashall由人胃黏膜分離出幽門螺桿菌(H． pylori)后，H． pylori感染與慢性胃炎(CG)、胃潰瘍(GU)、十二指腸潰瘍(DU)和胃癌(GC)等疾病的關(guān)系逐步被人們所認(rèn)識。國際癌癥機(jī)構(gòu)已將H．pylori列為Ⅰ級致癌因子。γ—谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)是一種催化肽基轉(zhuǎn)移作用的酶，這種酶廣泛存在于原核和真核細(xì)胞中，在動物體內(nèi)主要存在于腎、肝、胰等臟器，在谷胱苷肽的新陳代謝中起到了重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)

2、H． pylori分泌的GGT通過抑制CD4+T細(xì)胞的增殖，從而抑制了CD4+T細(xì)胞對H． pylori的清除作用，可見GGT對H． pylori的定植有一定的作用。GGT參與誘導(dǎo)H． pylori介導(dǎo)的程序性細(xì)胞死亡，可能是一個好的抗腫瘤因子。但程序性細(xì)胞死亡的持續(xù)發(fā)生，破壞了新細(xì)胞生成和細(xì)胞消亡之間的平衡產(chǎn)生病理作用，凋亡調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)變和突變頻繁的發(fā)生，反而增加了胃癌發(fā)生的危險性。有關(guān)H． pylori GGT的生物學(xué)機(jī)制研究尚未見

3、報道。 本研究從人胃粘膜組織中分離出H． pylori菌株，經(jīng)固體培養(yǎng)后提取全基因組DNA，采用PCR技術(shù)分別擴(kuò)增出了來源于胃炎(5例)、胃潰瘍(5例)、十二指腸潰瘍(5例)和胃癌(5例)等H． pylori菌株的ggt全長片段，進(jìn)行了克隆和序列測定，并與標(biāo)準(zhǔn)株26695((GenBank登錄號：NC_000915)和J99(GenBank登錄號：NC_000921)進(jìn)行比對，了解菌株間的差異。構(gòu)建該基因的原核表達(dá)載體，并進(jìn)行表

4、達(dá)，并構(gòu)建真核的融合表達(dá)載體，在人胃癌上皮細(xì)胞SGC-7901中進(jìn)行表達(dá)和蛋白定位，為進(jìn)一步研究GGT的生物機(jī)制和GGT與線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系提供依據(jù)。 結(jié)果表明4種病源的H． pylori ggt全長序列大小均為1704 bp，編碼567個氨基酸，理論分子質(zhì)量是61 KD，等電點(diǎn)是9.3，在N端具有信號肽，剪切位點(diǎn)位于第26和27個氨基酸處，含有ATP蛋白激酶結(jié)合結(jié)構(gòu)域和γ—谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶保守結(jié)構(gòu)域。與H． pylor