血小板激活因子乙酰水解酶在鉤端螺旋體病出血機制中的作用.pdf

1、鉤端螺旋體(鉤體)對宿主的侵襲引起的廣泛出血是鉤體病急性惡化致死的重要病癥，但是造成這一嚴重后果的過程及其機理并不清楚。前期研究確認鉤體自身編碼類似哺乳動物的血小板激活因子乙酰水解酶(Platelet-activatingfactoracetylhydrolase，PAF-AH)，其在一級和三級結構上類似于哺乳動物胞內PAF-AHⅠ型，但是底物特異性類似于血漿型PAF-AH。本研究推測鉤體PAF-AH通過滅活血小板激活因子(Platel

2、et-activatingfactor，PAF)的生理活性，阻止凝血過程中血小板的有效聚集，從而可能在導致宿主多臟器出血過程中起到某種作用。 通過對健康的人和13種常規(guī)的實驗動物血清中PAF-AH的定量測定，發(fā)現(xiàn)各種動物本底血清中PAF-AH水平差異很大，而長爪沙鼠的本底血清中PAF-AH水平與健康人體最為接近。連續(xù)32天檢測沙鼠血清中PAF-AH水平，發(fā)現(xiàn)其活性穩(wěn)定。又使用已鑒定毒力的鉤體感染沙鼠，發(fā)現(xiàn)沙鼠容易感染鉤體，并且感

3、染后具有鉤體病典型的發(fā)病特點。因此，其適合作為研究PAF-AH在鉤體病出血中作用的動物模型。 通過已經(jīng)建立的鉤體病完整病程的沙鼠模型，本研究發(fā)現(xiàn)鉤體感染引起的沙鼠肺出血和死亡率密切相關，進一步數(shù)據(jù)顯示宿主血清中PAF-AH總活力的變化和鉤體病肺出血密切相關，并與鉤體來源的PAF-AH無關。流行病學調查發(fā)現(xiàn)感染強毒株黃疸出血型鉤體患者血清中的酶活高于感染非黃疸出血型鉤體患者血清中的酶活，而感染非黃疸出血型鉤體的患者血清中的酶活類似

4、于健康人血清中的酶活。因此，血清中PAF-AH活力可以作為鉤體病肺出血的潛在臨床檢測指標，有助于改善對鉤體病預后的監(jiān)測和及時采取措施，從而防止急性惡化的發(fā)生，降低死亡率。另外，本研究推測宿主PAF-AH，即胞內PAF-AHⅠ型的泄漏或血漿型PAF-AH的上調引起血清中PAF-AH總活力的升高。 為此，本研究在大腸桿菌中克隆、表達和純化了人Ⅰ型PAF-AH，發(fā)現(xiàn)重組人Ⅰ型PAF-AH能水解血漿型PAF-AH商業(yè)化的底物之一--2-

5、ThioPAF，但是不能水解人血漿型PAF-AH的另外一個商業(yè)化底物--1-myristoyl-2-(4-nitrophenylsuccinyl)phosphatidylcholine。因此，利用Ⅰ型PAF-AH和血漿型PAF-AH對兩個商業(yè)化底物的底物特異性不同，可以快速區(qū)分人Ⅰ型PAF-AH和血漿型PAF-AH，從而為后續(xù)鑒定鉤體感染后血清中宿主PAF-AH的類型--血漿型或Ⅰ型PAF-AH，分析各個類型PAF-AH的含量提供技術手