家鴨leptin受體cDNA的克隆分析及外源leptin對家鴨生殖機(jī)能的影響.pdf

1、瘦素(leptin)是由白色脂肪組織分泌的一種重要的攝食調(diào)控和能量代謝調(diào)節(jié)因子，不僅參與維持能量代謝的平衡，對動物生長發(fā)育、繁殖等生理過程也起著重要的作用。與哺乳動物中的研究相比，leptin在禽類中的研究相對滯后。本文以金定鴨為研究對象，克隆了家鴨 leptin受體(leptin receptor，LEPR)2種亞型基因，同時(shí)進(jìn)行了組織器官定位分析；進(jìn)行了外源 leptin對禁食后恢復(fù)期家鴨受損卵巢恢復(fù)調(diào)控的初步探索及可能機(jī)制研究。取

2、得了如下結(jié)果： (1)以家鴨卵巢cDNA為模板，利用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT—PCR)和cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù)首次克隆了家鴨 LEPR兩種選擇性剪切體LEPR—a和 LEPR—b，獲得了編碼區(qū)全部序列，并進(jìn)行了功能區(qū)分析。家鴨的LEPR—b編碼區(qū)全長3468bp，編碼1155個(gè)氨基酸，與雞的LEPR—b蛋白序列同源性達(dá)81.7％，與人和鼠的 LEPR—b蛋白序列同源性分別為51.9％和50.1％。家鴨的 LEPR—b具有

3、哺乳動物 LEPR—b中可以激活 JAK—STAT信號途徑的所有功能區(qū)。家鴨 LEPR—a是禽類中首次發(fā)現(xiàn)的一種LEPR的選擇性剪切體，其中編碼區(qū)全長2670bp，編碼889個(gè)氨基酸。家鴨 LEPR—a與哺乳動物的 LEPR—a類似，胞質(zhì)區(qū)只有一個(gè) JAK2結(jié)合區(qū) box，能否激活 JAK—STAT途徑有待進(jìn)一步研究。 (2)以成年家鴨垂體、性腺、肺、脂肪等14個(gè)組織器官樣品為研究材料，利用半定量 RT—PCR的方法分析了 LE

4、PR—a和LEPR—b在家鴨組織器官中的表達(dá)特異性，結(jié)果表明：LEPR—b在各組織器官中均有表達(dá)，其中在垂體，性腺，肺、腎臟、肌肉、脂肪中有高表達(dá)；LEPR—a各組織器官中的表達(dá)量一般低于 LEPR—b，僅在睪丸、小腦和垂體中有大量表達(dá)。 (3)2天禁食引起了家鴨卵巢的受損，3天恢復(fù)期也不能很好地恢復(fù)卵巢狀態(tài)，表現(xiàn)為卵巢形態(tài)的萎縮，組織學(xué)上的病變。這些可能與禁食引起的血清 E2和 P4激素水平的降低，同卵巢中雌激素受體β(est

5、rogen receptor—β，ER—β)、卵泡刺激素受體(follicle stimulating hormone receptor，F(xiàn)SHR)、促黃體生成素受體(luteinizing hormone receptor，LHR)、1型促性腺激素釋放激素(gonadotrophin hormone—releasing hormone—Ⅰ，GnRH—Ⅰ)、生長激素受體(growth hormone receptor，GHR)和LEPR

6、—b等生殖相關(guān)基因mRNA水平表達(dá)的降低有關(guān)。適當(dāng)濃度的外源leptin(250μg/kg體重/d)可以促進(jìn)家鴨受損卵巢的恢復(fù)，可能與leptin處理后血清E2水平的上升有關(guān)，同卵巢中ER-β、FSHR、LHR、GnRH、GHR、LEPR-b等生殖相關(guān)基因mRNA水平表達(dá)的增加有關(guān)。而同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)高濃度的外源 leptin(1000μg/kg體重/d)可能對卵巢恢復(fù)有抑制作用，對禁食后恢復(fù)期中受損卵巢的恢復(fù)不利，與血清E2的降低，卵巢中