腦缺血治療藥物對(duì)細(xì)胞黏附分子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：以大鼠急性腦缺血再灌注損傷為動(dòng)物模型，觀察燈盞花素和步長(zhǎng)腦心通對(duì)細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)和血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)的影響。在此基礎(chǔ)上，利用基因芯片探討燈盞花素、白藜蘆醇苷、尼莫地平及DANC對(duì)細(xì)胞黏附分子(CAMs)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)。體外培養(yǎng)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，研究燈盞花素和白藜蘆醇苷以及銀杏提取物對(duì)炎癥因子白介素-1β(IL-1β)或脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的ICAM-1、VCAM-1、E-選擇素

2、(E-selectin)和P-選擇素(P-selectin)表達(dá)的影響。 方法：(1)燈盞花素(12mg/kg)，腦心通(480mg/kg)，尼莫地平(12mg/kg)，白藜蘆醇苷(200mg/kg)及DANC(187.5mg/kg)連續(xù)灌胃7天，采用LongaEZ線栓法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，再灌注24h后取出腦組織，一部分行免疫組化觀察燈盞花素和腦心通對(duì)大鼠缺血再灌注后腦組織ICAM-1和VCAM-1的影響。制備腦組

3、織勻漿抽提RNA，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和芯片雜交，獲得不同藥物處理組與模型對(duì)照組CAMs相關(guān)基因表達(dá)水平的差異，評(píng)價(jià)以上五種藥物對(duì)大鼠缺血性腦損傷后CAMs基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。(2)分離培養(yǎng)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，運(yùn)用Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫細(xì)胞化學(xué)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)IL-1β或LPS誘導(dǎo)之后，MTT法觀察不同的藥物處理對(duì)細(xì)胞增殖的影響，細(xì)胞表面黏附分子抗原檢測(cè)采用ELISA及流式細(xì)胞術(shù)。 結(jié)果：(1)免疫組化的結(jié)果表明，缺

4、血再灌注損傷后梗死區(qū)血管內(nèi)皮細(xì)胞大量表達(dá)ICAM-1和VCAM-1，而燈盞花素明顯下調(diào)二者的表達(dá)，腦心通對(duì)ICAM-1的抑制作用較其對(duì)VCAM-1的作用強(qiáng)。芯片雜交的數(shù)據(jù)顯示，模型與空白對(duì)照兩組比較，得到5個(gè)在模型組中明顯上調(diào)的基因，分別是ICAM-1、VLA-4、VCAM-1，CD44和L-selectin，表明這5個(gè)基因與缺血再灌注后的腦損傷有關(guān)。對(duì)于不同藥物預(yù)處理的大鼠腦組織，對(duì)CAMs基因表達(dá)改變各有不同。燈盞花素在下調(diào)ICAM

5、-1，VLA-4，PECAM-1，L-selectin及VCAM-1的同時(shí)，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞黏附分子(NCAM)的表達(dá)有上調(diào)作用。而尼莫地平在燈盞花素的基礎(chǔ)之上還下調(diào)了P-selectin。DANC、白藜蘆醇苷口服及靜脈注射主要影響L-selectin，P-selectin及VCAM-1。(2)結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞在倒置顯微鏡下的形態(tài)學(xué)特征及Ⅷ因子相關(guān)抗原鑒定結(jié)果，確認(rèn)分離培養(yǎng)的為血管內(nèi)皮細(xì)胞。靜息的內(nèi)皮細(xì)胞表面只表達(dá)少量的ICAM-1和VCAM-1

6、，而不表達(dá)E-selectin和P-selectin。經(jīng)炎癥因子IL-1β或LPS刺激之后，表達(dá)明顯增強(qiáng)，其中以ICAM-1的上調(diào)最為明顯。燈盞花素注射液不同程度的抑制了ICAM-1，VCAM-1及E-selectin的表達(dá)，其中以50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml的濃度呈濃度依賴趨勢(shì)。60μM的白藜蘆醇苷對(duì)ICAM-1和VCAM-1有抑制作用，但對(duì)E-selectin和P-selectin的影響沒(méi)有顯著性差異。燈盞花素和

7、白藜蘆醇苷對(duì)體外誘導(dǎo)的CAMs均有不同程度的抑制作用，但并不影響細(xì)胞的增殖。此外，不同濃度的銀杏提取物(GBE)對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)E-selectin均有抑制作用。 結(jié)論：CAMs的表達(dá)與缺血性腦損傷密切相關(guān)，燈盞花素和腦心通對(duì)缺血性腦損傷的改善和保護(hù)作用可能與下調(diào)CAMs有關(guān)。缺血性腦損傷后CAMs的基因表達(dá)也有影響，燈盞花素、白藜蘆醇苷、DANC、尼莫地平對(duì)CAMs的基因表達(dá)均有不同程度的調(diào)節(jié)，但作用的靶