當(dāng)歸多糖對小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞黏附分子表達(dá)及其黏附功能的影響.pdf

1、骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal cell，BMSC)是造血微環(huán)境的主要組成部分，一方面通過分泌體液因子調(diào)控造血；另一方面，通過細(xì)胞間的直接接觸作用于造血干/祖細(xì)胞(hematopoietic progenitor/stemcell，HSPC)的各個(gè)階段，BMSC與造血細(xì)胞之間的直接接觸是通過其表面的粘附分子來實(shí)現(xiàn)的，對造血細(xì)胞的增殖與分化起直接支持作用，并且參與HSPC的動(dòng)員和歸巢，其結(jié)構(gòu)和功能的完整性對于保護(hù)機(jī)體

2、造血的穩(wěn)定性具有十分重要的作用。粘附分子分為整合素家族、選擇素家族及免疫球蛋白基因超家族等多種。其中細(xì)胞間粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1，CD54)和血管細(xì)胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1，CD106)是免疫球蛋白基因超家族中最常表達(dá)的兩種粘附分子，在介導(dǎo)BMSC對造血細(xì)胞的粘附及二者間的信息傳遞方面起重要作用

3、。VCAM-1和ICAM-1有多種功能：能協(xié)助造血細(xì)胞粘附定位于利于發(fā)育的微環(huán)境；參與造血細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞形成多聚體；參與HSPC的動(dòng)員。近年來，VCAM-1、ICAM-1等黏附分子已成為研究的熱點(diǎn)。 當(dāng)歸作為中醫(yī)“補(bǔ)血、活血”要藥已有數(shù)千年的臨床應(yīng)用歷史。研究表明：當(dāng)歸多糖(Angelica polysaccharides,APS)是當(dāng)歸中促進(jìn)造血的有效成分，對正?；蜇氀∈蟮乃柘翟煅婕?xì)胞(BFU-E、CFU-E、CFU-GM

4、和CFU-MK)的增殖分化有顯著的促進(jìn)作用；同時(shí)APS在體外可促進(jìn)人紅系、粒單系及混合系造血祖細(xì)胞的增殖與分化。前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)：APS對小鼠HSPC有一定的動(dòng)員作用，與重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(recombinate human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)聯(lián)合動(dòng)員的效果好于單用APS或單用rhG-CSF的動(dòng)員效果，并且APS動(dòng)員的小鼠HSPC能夠重建造血衰竭小鼠長期造血

5、。目前關(guān)于BMSC在造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cell，HSC)動(dòng)員中的作用已有很多報(bào)道。但是APS的動(dòng)員機(jī)制還未見報(bào)道，其動(dòng)員作用是否是通過改變粘附分子如ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)及其黏附功能來實(shí)現(xiàn)有待進(jìn)一步深入探討。這一研究結(jié)果將為改善骨髓造血微環(huán)境，促進(jìn)HSPC的動(dòng)員提供新的思路。 本研究以BAL,B/c小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，分為兩個(gè)部分進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究：1.細(xì)胞密度和血清對小鼠BMSC體外生長的影

6、響。2.APS對小鼠BMSC生長、黏附分子表達(dá)及其黏附功能的影響。本研究旨在探討APS促進(jìn)造血以及參與HSPC動(dòng)員的可能機(jī)制，其深入研究將為進(jìn)一步開發(fā)和利用當(dāng)歸提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1.細(xì)胞密度和血清對小鼠BMSC體外生長的影響 目的：研究不同細(xì)胞接種密度、血清濃度及種類對小鼠BMSC體外生長的影響。 方法：設(shè)置不同細(xì)胞密度、不同種類血清及血清量的培養(yǎng)體系，觀察小鼠BMSC的貼壁情況，細(xì)胞80％貼壁時(shí)間，用臺盼藍(lán)

7、排斥試驗(yàn)檢測活細(xì)胞率，MTT法檢測細(xì)胞增殖情況，HE染色光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。 結(jié)果： 1.原代全血培養(yǎng)的小鼠BMSC適宜接種密度為(1～4)×106/mL。 2.細(xì)胞最適生長的血清濃度為10％～20％。 3.與胎牛血清相比馬血清對小鼠BMSC的促增殖作用更好(P＜0.05)。 4.不同種類血清培養(yǎng)的小鼠BMSC類型有一定差異(P＜0.05)。 結(jié)論：不同細(xì)胞接種密度及血清濃度和血清種類對小

8、鼠BMSC體外生長有一定影響。 2.當(dāng)歸多糖對小鼠BMSC黏附分子表達(dá)和黏附功能的影響 目的：研究APS對小鼠BMSC增殖、粘附分子ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)及其對骨髓單個(gè)核細(xì)胞黏附功能的影響。 方法：觀察APS對小鼠BMSC消化時(shí)間的影響；MTT法檢測APS對小鼠BMSC增殖及對骨髓單個(gè)核細(xì)胞黏附功能的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測APS體內(nèi)外對小鼠BMSC表面黏附分子ICAM-1和VCAM-1表達(dá)的影響。

9、 結(jié)果： 1.100，200 mg/L，APS使BMSC達(dá)80％貼壁后消化時(shí)間明顯縮短(P＜0.05)。 2.50，1 00 mg/L APS組BMSC增殖能力較強(qiáng)(P＜0.05)。 3.體外培養(yǎng)中加入200，300 mgm APS能使BMSC表面ICAM-1表達(dá)降低；加入50，100，200，300 mg/L APS均可使VCAM-1表達(dá)降低(P＜0.05)。小鼠體內(nèi)腹腔注射1，2，4，6 mg/kg APS均

10、可使ICAM-1、VCAM-1表達(dá)比對照組降低(P＜0.05)。 4.100，200，300 mg/L APS使小鼠BMSC對骨髓單個(gè)核細(xì)胞黏附率減弱(P＜0.05)。 結(jié)論：APS能促進(jìn)小鼠BMSC增殖，降低其表面黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)，進(jìn)而使小鼠BMSC達(dá)80％貼壁后消化時(shí)間明顯縮短，對骨髓單個(gè)核細(xì)胞的黏附率減弱。 綜上所述，APS能促進(jìn)小鼠BMSC增殖，降低黏附分子ICAM-1和VCAM-