巰基烷基化殼聚糖介導(dǎo)pIRES-hVEGF-,121-cDNA-hBMP-4真核雙表達(dá)質(zhì)粒修復(fù)兔橈骨缺損的初步研究.pdf

1、外傷或腫瘤等原因造成的骨缺損、骨不連的再生與修復(fù)一直是困擾修復(fù)重建外科的重要難題，其治療方法種類(lèi)繁多并各有利弊。目前在基礎(chǔ)研究和臨床治療領(lǐng)域，基因治療是其研究熱點(diǎn)。骨缺損的局部基因治療是將具有成骨作用目的基因攜帶病毒或非病毒表達(dá)載體或質(zhì)粒通過(guò)體內(nèi)直接轉(zhuǎn)移或體外擴(kuò)增途徑轉(zhuǎn)入靶細(xì)胞，由靶細(xì)胞轉(zhuǎn)錄成mRNA 并翻譯成蛋白質(zhì)。依靠蛋白質(zhì)的作用，靶細(xì)胞被刺激分化，通過(guò)自分泌或旁分泌的方式促進(jìn)成骨。隨著細(xì)胞重組技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多參與骨修復(fù)的生長(zhǎng)因

2、子的基因被成功克隆，使得基因治療骨缺損成為一種可能。該方法的優(yōu)點(diǎn)是:基因產(chǎn)物可以局部和靶向釋放；可最大限度地增加局部治療效果，減少全身副作用；多種基因可分別轉(zhuǎn)導(dǎo)，并分別調(diào)控內(nèi)源性合成的蛋白質(zhì)比外源性重組蛋白具有更強(qiáng)的生物活性等?；蛑委煴徽J(rèn)為是維持骨缺損局部生長(zhǎng)因子有效治療濃度最有希望的一種方法。自Urist (1965年)首先發(fā)現(xiàn)并制備出了牛的骨形態(tài)發(fā)生蛋白（Bone Morphogenetic Protein，BMP）粗提物以來(lái)，B

3、MP被廣泛應(yīng)用于骨缺損和異位成骨的研究。BMP是骨生長(zhǎng)的啟動(dòng)因子，能誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞和骨細(xì)胞，促進(jìn)鈣化作用，產(chǎn)生鈣化的骨基質(zhì)。但骨缺損的修復(fù)是一個(gè)復(fù)雜的受多種細(xì)胞因子調(diào)控的過(guò)程，每一種分子都有特定的作用時(shí)間和特定的功能范圍，其中再生骨組織中的血管再生是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前國(guó)內(nèi)外研究較多的是采用BMP和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)協(xié)同作用來(lái)修復(fù)骨缺損。VEG

4、F是屬于血小板源性生長(zhǎng)因子家族中的一個(gè)成員，是機(jī)體內(nèi)促進(jìn)血管生長(zhǎng)的最主要的生長(zhǎng)因子，能特異地作用于內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)其增殖和血管生成，參與骨的再生與修復(fù)過(guò)程，在骨折愈合的不同階段幾乎都有表達(dá)，可直接或間接影響骨修復(fù)及血管再生的各個(gè)環(huán)節(jié)。眾多研究表明VEGF與BMP可通過(guò)聯(lián)合方式促進(jìn)骨組織的再生與修復(fù)，但是其相互協(xié)同作用機(jī)制尚不十分明確，因選擇基因載體的差異而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率也不盡相同。因此，各種骨再生生長(zhǎng)因子間是如何相互作用促進(jìn)骨再生的；選擇何

5、種副作用小轉(zhuǎn)染效率高的載體，并改造基因載體提高基因轉(zhuǎn)染效率，實(shí)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)染的靶向性和可調(diào)控性是目前需深入研究的內(nèi)容。本課題組前期構(gòu)建的pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4真核雙表達(dá)質(zhì)粒向成骨方向的研究已明確，本研究旨在將制備的巰基烷基化殼聚糖（Thiolated N-alkylated chitosan，TACS）介導(dǎo)的pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4雙核共表達(dá)質(zhì)粒應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察其在骨缺損修復(fù)中的作用