松材線蟲纖維素酶特異性研究.pdf

1、本研究以采自浙江省松材線蟲病疫區(qū)黑松、馬尾松樣品中分離得到松材線蟲為研究對(duì)象，分析松材線蟲病檢測(cè)過程中可能作為特異性檢測(cè)信號(hào)的松材線蟲纖維素酶的活力和酶學(xué)性質(zhì)，并通過與試驗(yàn)篩選出的微生物所分泌的纖維素酶進(jìn)行對(duì)比，判斷其作為松材線蟲病檢測(cè)特異性信號(hào)可行性的基礎(chǔ)性研究。 通過試驗(yàn)測(cè)試證明，松材線蟲纖維素酶與試驗(yàn)篩選出的微生物所分泌的纖維素酶，在酶促反應(yīng)最適溫度、酶促反應(yīng)最適pH值、金屬離子對(duì)酶活力影響以及分子量大小方面均有明顯差異。

2、 本研究取得的主要結(jié)果如下： 1．從浙江省松材線蟲病疫區(qū)共采集黑松、馬尾松樣品26個(gè)，實(shí)驗(yàn)室分離樣品中的真菌，得到菌株307株，已鑒定出的 158 株菌株包括木霉屬 Trichoderma、青霉屬Penicillium、葡萄座腔菌屬 Botryosphaeria、盤多毛孢屬 Pestalotia、膠帚霉屬Gliocladium、曲霉屬 Aspergillus、短梗霉屬Aureobasidium、長(zhǎng)喙殼屬 Ceratocy

3、stis、球殼孢屬Sphaeropsis、枝頂孢霉屬Acremonium，其中以木霉屬、青霉屬、曲霉屬和葡萄座腔菌屬為優(yōu)勢(shì)屬。 用剛果紅染色法在松材線蟲懸液以及離心后不含松材線蟲的上清液中均檢測(cè)出了纖維素酶活性。對(duì)已鑒定出的158株菌株進(jìn)行染色，結(jié)果顯示96株為產(chǎn)酶菌株。經(jīng)鑒定這些真菌分別屬于木霉屬Trichoderma、青霉屬Penicillium和曲霉屬Aspergillus。實(shí)驗(yàn)室分離得到的細(xì)菌經(jīng)產(chǎn)酶檢測(cè)未見可以分泌纖維素

4、酶的種類。 2．對(duì)比松材線蟲纖維素酶和7種真菌纖維素酶的活力和酶學(xué)性質(zhì)發(fā)現(xiàn)：除變色青霉外其他真菌纖維素酶C<,1>酶活力均低于松材線蟲；松材線蟲纖維素酶測(cè)得最高酶活力的反應(yīng)溫度比真菌纖維素酶低5℃左右；松材線蟲C<,X>酶酶促反應(yīng)最適pH比真菌C<,X>酶高1～1.5個(gè)單位。K<'+>、Ba<'2+>、Zn<'2+>和Al<'3+>離子對(duì)松材線蟲纖維素酶和真菌纖維素酶活力的影響有明顯差異。分析SDS-聚丙烯胺凝膠電泳結(jié)果發(fā)現(xiàn)，松