北柴胡譜效關(guān)系研究及超臨界提取物GC-MS分析.pdf

1、　　目的：一方面建立柴胡總皂苷含量測定方法,運用所建立的方法對不同產(chǎn)地及不同采收期的北柴胡藥材進行含量測定；研究柴胡總皂苷對四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型的影響,掌握其藥效特點,為北柴胡譜效關(guān)系探討奠定基礎(chǔ)；對北柴胡皂苷類成分的高效液相(HPLC-ELSD)色譜指紋圖譜與保肝作用進行相關(guān)性分析,闡明北柴胡保肝作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)；一方面以河南嵩縣地區(qū)北柴胡為對象,研究北柴胡超臨界提取物的化學(xué)成分及動態(tài)積累規(guī)律。
　　方法：含量測定

2、以柴胡皂苷a為對照品,磷酸-對二甲氨基苯甲醛顯色；藥效學(xué)研究采用腹腔注射四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷,以柴胡總皂苷高、中、低劑量同時預(yù)防給藥7天,檢測空白組、對照組、總皂苷不同劑量組小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性,同時測定肝組織中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性；譜效關(guān)系研究采用HPLC-ELSD方法構(gòu)建北柴胡正丁醇部位的色譜指紋圖譜特征,以藥效學(xué)的研究方法獲取北柴胡正丁醇部位對四氯化碳所致小鼠

3、急性肝損傷血清中 ALT 和 AST 水平值以及肝組織中MDA 含量和 SOD 活力值。利用化學(xué)計量學(xué)與典型相關(guān)分析為處理手段對色譜-藥效數(shù)據(jù)進行相關(guān)分析；運用氣相-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)分析北柴胡超臨界提取物中化學(xué)成分的組成。
　　結(jié)果：以柴胡皂苷 a 為對照品的柴胡總皂苷含量測定在 0.0306~0.3062 mg內(nèi)線性關(guān)系良好(r = 0.9996),方法學(xué)考察結(jié)果的RSD均小于3.30%；與模型組比較,柴胡總皂苷(給藥劑

4、量20 g·kg-1,相當(dāng)于臨床用量的15.5倍)可有效抑制造模小鼠血清中ALT、AST的升高(P<0.05),同時可提高造模小鼠肝組織中SOD的活力,降低肝組織中MDA的含量(P<0.05)；HPLC-ELSD指紋圖譜中共提取出12個共有峰,系統(tǒng)聚類分析將12個共有峰歸為兩大類(―主皂苷‖簇和―微量皂苷‖簇)。不同產(chǎn)地柴胡藥材之間的保肝作用存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。聚類分析和典型相關(guān)分析確定了肝損傷血清中ALT水平值和肝組織中S

5、OD活力值與皂苷類化合物SSa和SSd之間的相關(guān)性,兩變量組中提取出的典型變量對U1,V1之間的相關(guān)系數(shù)為0.842,顯著水平α=0.039；從北柴胡超臨界提取物中共鑒定了36個相對含量較高的成分,占提取物總量的 74.32%-90.45%。提取物中脂肪酸類化合物相對含量在 45.10%-80.95%之間；醛類在 1.61%-5.65%之間；酮類在0.65%-1.28%之間；酯類在4.80%-8.12%之間。
　　結(jié)論：柴胡總皂

6、苷含量測定方法簡便易行,重現(xiàn)性好,可用于柴胡總皂苷含量的測定。不同產(chǎn)地北柴胡藥材的總皂苷含量存在明顯差異,不同采收期北柴胡藥材的總皂苷含量也存在明顯的差異,其中采收期為9月28日的北柴胡樣本的總皂苷含量最高；從北柴胡中提取的柴胡總皂苷對四氯化碳所致小鼠急性肝損傷具有保護作用；北柴胡保肝作用(血清中ALT水平值和肝組織中SOD活力值)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)為SSa和SSd。中藥譜效關(guān)系研究是探討北柴胡化學(xué)成分與藥效相關(guān)性的有效途徑。本文提出的數(shù)據(jù)